应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DGGE进样
61/1返回列表
查看: 987  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lhwen182

金虫 (正式写手)

[求助] DGGE进样

请教各位高手，跑DGGE时是不是一定要将PCR产物浓缩到一定体积？我50微升体系P完后跑胶时经常会有一条贯穿整个胶面的横带，这个是不是进样量过大导致飘带引起的？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-06-14 16:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caihy119

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3): 谢谢分享 2011-06-14 17:26:29
lhwen182(金币+2): 谢谢 2011-06-14 18:36:59
lhwen182(金币+2): 2011-06-15 20:20:59
反正我从来没有浓缩过, 跑得也挺好的. 我建议还是不要浓缩的好! PCR跑35个循环浓度已经很高了, 为什么还要浓缩呢?不过P后, 还是需要对产物纯化, 去掉引物二聚体还是很有必要的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-14 16:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小嫩瓜

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by caihy119 at 2011-06-14 16:30:00:
反正我从来没有浓缩过, 跑得也挺好的. 我建议还是不要浓缩的好! PCR跑35个循环浓度已经很高了, 为什么还要浓缩呢?不过P后, 还是需要对产物纯化, 去掉引物二聚体还是很有必要的

貌似是窜孔了吧，应该是样品跑出来了
赞一下 回复此楼
活的艰辛是因为执着和不放弃
3楼2011-06-14 17:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwen182

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-06-14 18:54:03
引用回帖:
Originally posted by caihy119 at 2011-06-14 16:30:00:
反正我从来没有浓缩过, 跑得也挺好的. 我建议还是不要浓缩的好! PCR跑35个循环浓度已经很高了, 为什么还要浓缩呢?不过P后, 还是需要对产物纯化, 去掉引物二聚体还是很有必要的

你的纯化是怎么做的啊？好像我问的几个老师都没怎么做纯化，他只是将产物真空浓缩后就跑了。再说引物二聚体不是很小么，跑胶时不是会跑出去的么？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-14 18:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caihy119

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

lhwen182(金币+4): 2011-07-11 21:42:14
错了, 一般DGGE的条带长度400 bp左右, 而primer-dimer长度也可以达到100 bp左右, 如果你的DGGE梯度和电泳的时间不是足够, primer-dimer是还在胶里面的, 而且一般做实验为了保险起见, 一般是不会跑得太久的, 很有可能在最底部就是primer-dimer. 我的建议一定要纯化, 这样就保证你的DGGE没有问题. 现在有很多的纯化试剂盒可用，生工的， takara的， 都很好用的， 如果你有真空浓缩系统， 也可以用PEG8000沉淀后，离心浓缩，干燥也可以把primer-dimer去掉，而且可以浓缩你的PCR产物
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-16 09:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwen182

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by caihy119 at 2011-06-16 09:23:36:
错了, 一般DGGE的条带长度400 bp左右, 而primer-dimer长度也可以达到100 bp左右, 如果你的DGGE梯度和电泳的时间不是足够, primer-dimer是还在胶里面的, 而且一般做实验为了保险起见, 一般是不会跑得太久的, 很有可 ...

恩，谢谢你的建议。我再优化一下再做做看
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-17 15:18:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lhwen182 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 生命口面上会评结束了吗大家有知道结果吗？现在还没有结果正常不？ +3 碧水00 2026-07-16 5/250 2026-07-16 07:39 by jaasxulu
[基金申请] 生生命学部会评 +4 wuke100666 2026-07-15 4/200 2026-07-16 00:12 by 啦啦小妮子
[有机交流] 伯胺上甲基求助 100+4 002tmumu 2026-07-14 4/200 2026-07-15 22:01 by 学员oN9JQD
[基金申请] H口，面上，时间戳7月7日。 +3 plumage5 2026-07-15 3/150 2026-07-15 21:06 by 6543yes
[基金申请] 小木虫没落了，除了祈祷帖子，几乎看不到有价值的帖子 +13 botar 2026-07-14 14/700 2026-07-15 19:28 by 寒流32
[基金申请] 会评 +5 无名者登山 2026-07-15 5/250 2026-07-15 18:15 by 杠就是你对
[基金申请] E口会评 +11 布布和一二 2026-07-13 13/650 2026-07-15 16:34 by Kittylucky
[基金申请] E口青C会评结束了吗？ 40+3 小小书虫c 2026-07-14 9/450 2026-07-15 16:04 by 安静的知了
[基金申请] 生命口C13面上会评时间 +6 luckinging 2026-07-14 9/450 2026-07-15 14:39 by 雨冰共舞
[教师之家] 内心匮乏 +13 水冰月月野兔 2026-07-12 13/650 2026-07-15 14:21 by jiduquegai
[文学芳草园] 你可曾有过这种感受？ +3 Jeanya 2026-07-09 6/300 2026-07-15 11:07 by mbtwt
[论文投稿] 农业机械学报投稿周期 +3 G0DLIN 2026-07-14 7/350 2026-07-15 09:26 by xs74101122
[基金申请] 国自然面上D口祈祷 +4 monkeynana 2026-07-14 4/200 2026-07-15 09:14 by 白水煮
[论文投稿] 跨出版社商投稿 20+4 倪好520 2026-07-13 4/200 2026-07-15 08:35 by bobvan
[基金申请] 没收到消息，再次陪跑 +3 天空星辰fly 2026-07-14 3/150 2026-07-14 19:14 by 6543yes
[基金申请] 不要再数国自然申请书的 filecode 的分隔符个数了 +13 sadpencil 2026-07-12 20/1000 2026-07-14 13:12 by 杠就是你对
[基金申请] 明天E口面上会评 +8 布布和一二 2026-07-12 9/450 2026-07-13 22:59 by QTSorange
[基金申请] 祈祷青基必中 50+6 hadengry 2026-07-09 16/800 2026-07-12 20:31 by 登山虫虫
[考博] 27届辽宁大学应届毕业生申博 +3 可乐微风大海 2026-07-09 3/150 2026-07-10 21:23 by 贪玩的研究僧
[基金申请] 关于如何从代码看上不上会 +17 且听虎啸 2026-07-09 23/1150 2026-07-10 19:51 by sdfapple719
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭