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SongQ5285: 金币+2, 你重新开一贴，可能会有人帮你解答 2012-06-21 08:17:01
已经测过一次NADPH氧化酶的活性，但是数值没有变化，不知道是哪里出现了问题。实验的时候没有找到具体的操作步骤，只是找了N 篇文献综合总结了一下，想的实践出真知，就大胆的做了，结果失败了。哪位仁兄测过，指点一二。 我参照的实验方法：
由NADPH氧化酶生成的活性氧产物被检测到，在25度下，SOD抑制的，NADPH依赖的在550nm下细胞色素C的减少。像Heyworth et al （1993）描述那样，反应混合液包括0.1mM的细胞色素C，6.5mMMgCL,87Mmkcl,2.6mMNaCL,8.7mMPipes,Ph 7.3,10pM GTP(y)S,0.16Mmnadph,he10-15pg质膜蛋白，总体积1ml。对照试验包括50pg的SOD来说明在没有活性氧依赖的细胞色素的减少。DPI（at 5 pM），质膜NADPH氧化酶的一种酶激活不可逆抑制剂，抑制激发子激发的NADPH氧化酶的活性。
我遇到的问题：
膜蛋白是高速离心后提取的，应该没有什么问题。测定时加的是150微克。
我遇到的问题是：1，加入SOD和不加sod的对照和处理，及重复之间的吸光值都在0.200-0.215之间，数值之间没有差异。
2，虽然现在实验还没有做出来，但是希望您能把计算的公式也给我一份。
因为我没有找到详细的实验步骤。实验准备的时候我综合了好几个实验版本。下面是我的操作步骤，以便你帮助我找到我错误的地方：1 先加膜蛋白
2 （将所用的试剂配成混合液，有两份，一份加了SOD,一份没有）加入反应混合液。
3 加入NADPH启动反应，5min后测定其吸光值。
我一个处理做了6管，3管加的是有SOD的混合液，另外3管加的是没有SOD的混合液。
其实我也试过加入NADPH后立即测其5min的吸光值，但是在5min的反应过程中，吸光值根本没有变化。加入浓度的NADPH时吸光值有微小的变化。
我也想知道怎么做，求助，交流 |
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