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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » [求助]高保真酶扩不出来
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粉红小猪

新虫 (初入文坛)
我用高保真酶做PCR也有同样的困扰,如果楼主的问题解决了麻烦告诉我一下好吧
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11楼2012-04-09 10:40:15
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biobiobio

新虫 (初入文坛)
这个问题主要原因是高保真酶扩增能力不如普通taq酶，试试phanta吧，猛药，还有做的时候可以做个加PCR Enhancer的做为对照，这个enhancer有时能发挥神奇的效果
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12楼2012-11-26 21:54:17
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wangzhangwan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cellline at 2011-06-05 22:11:54
楼主是想做一些基因下游实验吧，Taq酶的活性确实要比高保真酶的活性强，这是公认的。鉴于这种情况，给你两种可供选择的Protocol：
1，若果你的目的片段不大，1-2.5kb，可以先用好一点的Taq酶扩增了，上质粒，测序没 ...

我想问一下，高保真和Taq酶混合到一起，混合的比例是多少？
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13楼2013-06-17 19:50:14
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cellline

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by wangzhangwan at 2013-06-17 19:50:14
我想问一下，高保真和Taq酶混合到一起，混合的比例是多少？...

最开始可以参照2:1的比例试试，这要看你前面的预实验中扩增效果和片段大小，如果扩增效果不好，可适当增加Taq酶的比例到1:1-1:2。
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14楼2013-06-17 21:40:08
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
高保真酶和普通Taq酶各有优缺点，高保真酶具有保真性可是不适用于所有模板，普通Taq酶扩增扩增特异性没有保证，所以，一般小于8kb的扩增，没有非常高的要求热启动酶足够满足条件，大于10kb的片段，就用LA Taq酶，反正还是根据自己的实验目的吧
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
15楼2015-07-22 15:56:28
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
8楼: Originally posted by glory_star at 2011-07-01 14:15:59
你看看你的BUFFER是不是完全的化了之后再加入的，我曾经就没化完就加了，结果也没有结果，高保真的酶对离子浓度的要求挺高的……

您好，想请教一下高保真taq聚合酶退火的问题
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
16楼2015-07-27 16:09:32
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