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30937747

木虫 (小有名气)

[求助] [求助]高保真酶扩不出来

我提取RNA做反转录得到cDNA,以cDNA为模板做PCR,用普通taq酶扩出来的片段很亮,而且专一性很好,但是换高保真酶都扩不出来,换了两种酶,温度梯度和浓度梯度都做了,延伸的时间也增长了一倍.但是就是没有结果,请问有什么好的建议吗?
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我依旧会努力.
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wangzhangwan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cellline at 2011-06-05 22:11:54
楼主是想做一些基因下游实验吧,Taq酶的活性确实要比高保真酶的活性强,这是公认的。鉴于这种情况,给你两种可供选择的Protocol:
1,若果你的目的片段不大,1-2.5kb,可以先用好一点的Taq酶扩增了,上质粒,测序没 ...

我想问一下,高保真和Taq酶混合到一起,混合的比例是多少?
13楼2013-06-17 19:50:14
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