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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » [求助]高保真酶扩不出来
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30937747

木虫 (小有名气)

[求助] [求助]高保真酶扩不出来

我提取RNA做反转录得到cDNA,以cDNA为模板做PCR,用普通taq酶扩出来的片段很亮,而且专一性很好,但是换高保真酶都扩不出来,换了两种酶,温度梯度和浓度梯度都做了,延伸的时间也增长了一倍.但是就是没有结果,请问有什么好的建议吗?
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我依旧会努力.
1楼 2011-06-05 16:46:48
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
高保真酶和普通Taq酶各有优缺点，高保真酶具有保真性可是不适用于所有模板，普通Taq酶扩增扩增特异性没有保证，所以，一般小于8kb的扩增，没有非常高的要求热启动酶足够满足条件，大于10kb的片段，就用LA Taq酶，反正还是根据自己的实验目的吧
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
15楼2015-07-22 15:56:28
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
8楼: Originally posted by glory_star at 2011-07-01 14:15:59
你看看你的BUFFER是不是完全的化了之后再加入的，我曾经就没化完就加了，结果也没有结果，高保真的酶对离子浓度的要求挺高的……

您好，想请教一下高保真taq聚合酶退火的问题
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
16楼2015-07-27 16:09:32
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