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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-01 18:29:24:
1.NaOH建议还是4度保存吧，还有就是如果在提质粒的时候如果加完二溶液冰浴5-10分钟后还没有粘稠的话，就没必要做下去了。
2.看看电流吧，会不会电泳液时间太长了。

NaOH为什么要4度保存，理由是什么？

加了溶液二之后为什么要零度处理？

你加了溶液二之后为什么要那么久才能破碎细胞？一加进去之后就已经破碎了。

条带好不好和电泳时间无关。

你提过质粒吗？
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11楼2011-06-02 17:59:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-04 11:14:50
看点样孔里发亮，是一部分DNA被阻挡住下不来，甚至有的泳道根本没有条带，DNA大部分被挡住了，是提质粒的时候杂质没有抽提干净。看步骤里是用氯化锂抽提的，这一步应该出了问题。条带也弥散，就不知道是什么原因了。用苯酚氯仿抽提效果会怎样？不知道条带弥散的问题会不会顺道解决了。
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12楼2011-06-02 18:20:44
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-04 11:14:59
本帖内容被屏蔽
13楼2011-06-02 18:27:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很热心，一步一步帮楼主分析呢。连前面的一并奖励！ 2011-06-03 18:37:57
氢氧化钠会长菌？0.1M的pH值就已经超过11了，长菌是因为pH值降下去了。氢氧化钠会吸收空气中的二氧化碳变成碳酸钠，但碳酸钠本身就是碱式盐，无论是放哪里，只要有空气，这个反应就会发生。

做宏基因组文库的时候电泳要超过8小时，条带一样好。质粒之类的一百毫安半小时也是经常事。
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14楼2011-06-02 18:37:35
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healerly

禁虫 (小有名气)
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15楼2011-06-03 18:19:46
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 确实如此，我也曾经把溶液2放4℃冰箱，都沉淀了。后面加热下就好了。 2011-06-03 21:51:20
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-03 18:19:46:
那我是否可以理解为您认为冰箱的空气环境和室外的环境是一样的啊？？放冰箱的理由无非就是减缓这个这个过程的发生啊~~

不知道从室温转移到四度，氢氧化钠吸收二氧化碳的速度会减缓多少，但是SDS如果温度低是会析出的（我曾经把溶液二放进四度），不知道你配成溶液二的时候有没有观察到什么现象。

而且空气环境不用计较，我放进四度的瓶子都是密封的，你不密封？
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16楼2011-06-03 21:06:18
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2): 似的 有时候我们班是比较迂腐 自己不思考 2011-06-04 11:15:31
本帖内容被屏蔽
17楼2011-06-03 21:56:29
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2): 标准操作视频里 都很“粗暴” 2011-06-04 11:15:56
引用回帖:
Originally posted by diduqiong at 2011-06-02 14:31:16:
你加溶液二的时候轻轻颠倒啊，看看点样孔那里那么亮的带，染色体都被你摇断了啊

动作轻不轻可能影响不大，我以前做的时候动作都比较粗糙，但是提的质粒每次都是又亮又粗。
个人认为，应重新配置容易，且要保存在4度冰箱中，用的时候要冰浴。如果排除了容易原因，那就要查菌和转化的问题了。
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18楼2011-06-04 11:11:50
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shuifen1108

金虫 (正式写手)
应该是溶液二的问题，在加溶液二和三的时候注意一下，我们以前也出现过类似的问题。如果找不到原因，建议买个提取质粒的试剂盒试试，不是很贵。
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19楼2011-06-04 12:02:01
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shuifen1108

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-06 00:19:06
你的marker跑的也不是很好，是不是电泳缓冲液的问题，有点弥散的感觉，全都重新换一遍溶液再试吧，这种实验单独找原因，还真是不好找
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20楼2011-06-04 12:07:32
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