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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取

不知道为什么最近两次提取的质粒老是如图这样子，条带模糊、弥散。挑取的是转化子
摇菌、使用溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和醋酸铵和氯化锂提取的，前几天刚提过其他的质粒，能提好，不存在试剂的问题（不过挑取转化子时没提好，之后甘油管活化再挑取的单菌落才提好）；每次都是本人亲自动手，应该也不存在操作问题吧！
还请各位大虾帮忙分析一下，中间一个是Marker（4微升点样），其他均为质粒（5微升点样）
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1楼 2011-06-01 11:02:24
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-01 18:29:24:
1.NaOH建议还是4度保存吧，还有就是如果在提质粒的时候如果加完二溶液冰浴5-10分钟后还没有粘稠的话，就没必要做下去了。
2.看看电流吧，会不会电泳液时间太长了。

NaOH为什么要4度保存，理由是什么？

加了溶液二之后为什么要零度处理？

你加了溶液二之后为什么要那么久才能破碎细胞？一加进去之后就已经破碎了。

条带好不好和电泳时间无关。

你提过质粒吗？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
11楼2011-06-02 17:59:01
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
yesucao(金币+3): 实验室的溶液2是高浓度的，放在室温有一段时间了，对于保存时间和问题之前没多大考虑 2011-06-01 17:49:55
yesucao(金币+7): 2011-06-01 17:50:15
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-01 18:26:53
本帖内容被屏蔽
2楼2011-06-01 13:32:05
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sxq大嘴

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎交流。为什么呢？ 2011-06-01 18:27:04
溶液2的问题，要不就是有DNA酶污染
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3楼2011-06-01 14:16:54
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-01 13:32:05:
1.可能是溶液二的问题，因为碱裂解法中二溶液，一般是现配现用，也可以用高浓度稀释，不知道你NaOH是怎么保存的？
2.如果不是溶液的问题的话，那就是电泳的问题了，看看是不是电压太大了~~

溶液2 是2%的SDS和0.4M的氢氧化钠，用的时候分别加100微升，均是室温保存；
每次跑电压一般是在90-100V之间
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4楼2011-06-01 17:40:54
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