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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒提取

不知道为什么最近两次提取的质粒老是如图这样子，条带模糊、弥散。挑取的是转化子
摇菌、使用溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和醋酸铵和氯化锂提取的，前几天刚提过其他的质粒，能提好，不存在试剂的问题（不过挑取转化子时没提好，之后甘油管活化再挑取的单菌落才提好）；每次都是本人亲自动手，应该也不存在操作问题吧！
还请各位大虾帮忙分析一下，中间一个是Marker（4微升点样），其他均为质粒（5微升点样）
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1楼 2011-06-01 11:02:24
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)
★ ★
1949stone(金币+2): 标准操作视频里 都很“粗暴” 2011-06-04 11:15:56
引用回帖:
Originally posted by diduqiong at 2011-06-02 14:31:16:
你加溶液二的时候轻轻颠倒啊，看看点样孔那里那么亮的带，染色体都被你摇断了啊

动作轻不轻可能影响不大，我以前做的时候动作都比较粗糙，但是提的质粒每次都是又亮又粗。
个人认为，应重新配置容易，且要保存在4度冰箱中，用的时候要冰浴。如果排除了容易原因，那就要查菌和转化的问题了。
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18楼2011-06-04 11:11:50
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
yesucao(金币+3): 实验室的溶液2是高浓度的，放在室温有一段时间了，对于保存时间和问题之前没多大考虑 2011-06-01 17:49:55
yesucao(金币+7): 2011-06-01 17:50:15
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-01 18:26:53
本帖内容被屏蔽
2楼2011-06-01 13:32:05
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sxq大嘴

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎交流。为什么呢？ 2011-06-01 18:27:04
溶液2的问题，要不就是有DNA酶污染
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3楼2011-06-01 14:16:54
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by healerly at 2011-06-01 13:32:05:
1.可能是溶液二的问题，因为碱裂解法中二溶液，一般是现配现用，也可以用高浓度稀释，不知道你NaOH是怎么保存的？
2.如果不是溶液的问题的话，那就是电泳的问题了，看看是不是电压太大了~~

溶液2 是2%的SDS和0.4M的氢氧化钠，用的时候分别加100微升，均是室温保存；
每次跑电压一般是在90-100V之间
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4楼2011-06-01 17:40:54
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