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激光扫描共聚焦显微技术：原理；标本制备和图像采集；应用，方面的论文
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激光共聚焦显微镜的主要原理是利用激光扫描束通过光栅针孔形成点光源，在荧光标记标本的焦平面上逐点扫描，采集点的光信号通过探测针孔到达光电倍增管（PMT），再经过信号处理，在计算机监视屏上形成图像。由于激光光源的光栅针孔和探测针孔对物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于光栅针孔和探测针孔，进行点扫描时，扫描点以外的点不会成像，经逐点扫描后才形成整个标本的光学切片（Optic section）。 主要生物学应用 1、组织和细胞中荧光标记的分子和结构的检测 标本制备方法主要有免疫荧光组织和细胞化学法、荧光蛋白标记分子法、荧光细胞染料标记法等。 2、定量或半定量测量Ca2+ 和pH等细胞内离子浓度及变化 利用Fluo23 、Fura2等荧光探针可以测量Ca2+在活细胞内的浓度及变化。 3、荧光光漂白及恢复技术 利用高能量激光束将细胞内某一部分中选定靶区域的某种荧光淬灭，然后观察邻近相同的荧光标记物重新扩散入该区域的速度和方式，从而分析细胞内蛋白质运输、受体在细胞膜上的流动和大分子组装等细胞生物学过程。 4、长时程观察细胞迁移和生长 可以用于数小时的长时程定时扫描，记录细胞迁移和生长等细胞生物学现象。 5、其他的生物学应用 用高能量激光束进行细胞损伤和损毁实验，一般要用紫外激光束进行细胞损毁；细胞间通讯研究；光解笼锁活化技术等。 |
2楼2011-05-30 12:07:39
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