| 查看: 3003 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
做过RNAi或者实时定量的同学请帮助我解决一个问题，感激不尽
|
||
|
最近在做RNAi，我的实验对象是秀丽隐杆线虫，采用的干扰方式是浸泡，将体外转录获得的dsRNA通过浸泡的方式导入线虫体内，收集虫体后提取总RNA，反转录成cDNA之后做实时定量检测干扰效果。可定量结果让我很头疼，目的基因的拷贝数不仅没有降低，反而升高了。如果说目的基因的拷贝数没有明显下降，可以解释为干扰效果不好，但是目的基因的拷贝数明显上升，这怎么解释？希望高手可以帮我解释一下这个现象，感激不尽~~~ 我个人认为，可能是浸泡后的虫体内残留有dsRNA，是不是因为在进行总RNA提取和反转录的时候将残留的dsRNA也一并提出并合成了cDNA，从而导致目的基因的拷贝数增加？如果这种推测成立，那么，在提取总RNA之前应该怎样对虫体进行处理，以消除dsRNA的干扰？ 我做的是相对定量，每次都做三个重复，以管家基因的拷贝数作为标准，计算目的基因的相对含量，可是实验组的目的基因含量每次都比阴性对照组高。另外，我本次干扰一共做了三个不同的基因，貌似三个不同的基因都出现了这样的情况，让人很费解，求帮助~~~ [ Last edited by 1949stone on 2011-5-30 at 16:24 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
跳仔mxl
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4891.3
- 散金: 661
- 红花: 7
- 帖子: 651
- 在线: 82.3小时
- 虫号: 2101596
- 注册: 2012-11-02
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
15楼2017-03-21 17:35:02
冷水清茶
捐助贵宾 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 2743.1
- 散金: 18
- 红花: 4
- 帖子: 108
- 在线: 59.4小时
- 虫号: 930732
- 注册: 2009-12-19
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
2楼2011-05-30 08:37:40
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
3楼2011-05-30 08:52:07
4楼2011-05-30 09:50:09