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cdl007

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-28 22:09:47
biofeixue(金币+10): 非常感谢！ 2011-05-29 04:26:53

引用回帖:

Originally posted by biofeixue at 2011-05-28 16:08:47:
看到很多文章里写用rRNA做内参的？不知道怎么做内参？内参不是用来标定各样品的cDNA量是不是一致的吗？如果用rRNA做内参，rRNA在反转录时，不能转录成cDNA，它又怎么来标定模板是不是一样的呢？

18s rRNA作为内参标准在RT-PCR运用中，以稳定表达著称。其优于GAPDH和beta-actin。

oligo（dT）反转录不能用18s rRNA作为内参,随机引物可以!

18SrRNA虽然不会有蛋白表达，但是它会反转，形成18S核糖体RNA

　　90%以上的RT-PCR应用单一的内参基因来校正与标准化目标基因的表达，其中最常用的包括GAPDH、β-actin、18S rRNA和28S rRNA等。

GAPDH mRNA在不同癌组织(包括肺癌、乳腺癌、肾细胞癌等)中的表达升高，在不同个体间、怀孕期间以及细胞周期的不同阶段等变化很大

当细胞向恶性转化时，β-actin mRNA的表达水平增加；而假基因的的存在也可干扰β-actin的检测。

rRNA用作内参还有如下缺点：① 当对已纯化mRNA中的目标基因进行定量时，rRNA不能用于标准化；②rRNA高丰度表达，远远高于目标mRNA，较其他内参基因稳定且受RNA降解的影响较小；③ rRNA不包括poly(A)尾，在以oligo(dT)为引物的cDNA合成中不能被逆转录。

更详细的东西可以看看这个网址，总结的非常好http://www.bioask.cn/html/1100.html

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2楼2011-05-28 19:48:48

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