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lliuzhi

金虫 (正式写手)

[求助] PCR求助

采用两对引物扩增，引序列和电泳结果均标注在图上，1,2，3为平行实验。扩增的条带应有1002 bp，500 bp， 794bp， 292bp，但是电泳后无794 bp条带，却出现一500多bp的条带，请高人指教是怎么回事，谢谢!
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1楼2011-05-27 11:15:04
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
请问您的PCR是做什么用的？为什么不分开P呢？
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2楼2011-05-27 11:21:13
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
信息太少，无法应助。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-27 11:45:21
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-27 19:25:46
lliuzhi(金币+5): 2011-05-30 22:33:51
我觉得你的1002也不能确定是正确大小的条带，现在看来你的6F引物可能存在假引物，结合位置应该是在5F和6F之间，你可以blast一下，看看有没有我说的这种可能。另外，我也有二楼的问题，为什么要放在一起PCR？
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4楼2011-05-27 12:11:23
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lliuzhi(金币+5): 2011-06-01 17:46:13
建议配对引物单独进行PCR, 条件优化。
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5楼2011-05-27 14:33:18
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
dhd997: 可以引用回复哦，方便交流，也可以在一楼编辑哦 2011-05-27 19:26:37
单独的有做过，都是可以得到目的条带的
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6楼2011-05-27 14:45:58
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-27 19:26:03
lliuzhi(金币+5): 2011-06-01 17:46:24
怎么两个5F-6R啊 你在一个管里PCR 没准引物的Tm值什么的不合适或者循环数不合适都有可能造成P不出来啊 有可能是引物之间的错配引发或者竞争而导致杂带什么的出现
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7楼2011-05-27 17:12:58
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
500 bp的是6F-6R,但是1000左右的那个片段都可以P出来，如果是竞争，794的不是比1000的更短，更容易吗？还有就是两对引物的退火温度也就相差2度，问题应该不是很大吧
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8楼2011-05-29 11:25:13
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

lliuzhi(金币+5): 2011-06-01 17:46:34
引用回帖:
Originally posted by lliuzhi at 2011-05-27 14:45:58:
单独的有做过，都是可以得到目的条带的

既然单独做出来过 为什么非要把两对引物一起扩呢 毕竟这4个引物会随机匹配的
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9楼2011-05-29 13:02:09
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lliuzhi at 2011-05-27 14:45:58:
单独的有做过，都是可以得到目的条带的

既然单独反应没问题，引物没问题，那么多引物一起，不知道发生什么了。肯定有优势反应，不妨试试两三对引物

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2011-05-29 19:58:04
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