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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lliuzhi

金虫 (正式写手)

[求助] PCR求助

采用两对引物扩增,引序列和电泳结果均标注在图上,1,2,3为平行实验。扩增的条带应有1002 bp,500 bp, 794bp, 292bp,但是电泳后无794 bp条带,却出现一500多bp的条带,请高人指教是怎么回事,谢谢!
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

请问您的PCR是做什么用的?为什么不分开P呢?
2楼2011-05-27 11:21:13
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

信息太少,无法应助。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-27 11:45:21
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-27 19:25:46
lliuzhi(金币+5): 2011-05-30 22:33:51
我觉得你的1002也不能确定是正确大小的条带,现在看来你的6F引物可能存在假引物,结合位置应该是在5F和6F之间,你可以blast一下,看看有没有我说的这种可能。另外,我也有二楼的问题,为什么要放在一起PCR?
4楼2011-05-27 12:11:23
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

lliuzhi(金币+5): 2011-06-01 17:46:13
建议配对引物单独进行PCR, 条件优化。
5楼2011-05-27 14:33:18
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lliuzhi

金虫 (正式写手)

dhd997: 可以引用回复哦,方便交流,也可以在一楼编辑哦 2011-05-27 19:26:37
单独的有做过,都是可以得到目的条带的
6楼2011-05-27 14:45:58
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-27 19:26:03
lliuzhi(金币+5): 2011-06-01 17:46:24
怎么两个5F-6R啊 你在一个管里PCR 没准引物的Tm值什么的不合适或者循环数不合适都有可能造成P不出来啊 有可能是引物之间的错配引发或者竞争而导致杂带什么的出现
7楼2011-05-27 17:12:58
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lliuzhi

金虫 (正式写手)

500 bp的是6F-6R,但是1000左右的那个片段都可以P出来,如果是竞争,794的不是比1000的更短,更容易吗?还有就是两对引物的退火温度也就相差2度,问题应该不是很大吧
8楼2011-05-29 11:25:13
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

lliuzhi(金币+5): 2011-06-01 17:46:34
引用回帖:
Originally posted by lliuzhi at 2011-05-27 14:45:58:
单独的有做过,都是可以得到目的条带的

既然单独做出来过 为什么非要把两对引物一起扩呢 毕竟这4个引物会随机匹配的
9楼2011-05-29 13:02:09
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by lliuzhi at 2011-05-27 14:45:58:
单独的有做过,都是可以得到目的条带的

既然单独反应没问题,引物没问题,那么多引物一起,不知道发生什么了。肯定有优势反应,不妨试试两三对引物

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2011-05-29 19:58:04
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