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darswinxie

新虫 (小有名气)

[求助] 液相 流动相配制出现问题了。怎么办???

关于流动相配制问题

各位大侠好。
本人现在在用HPLC-ECD检测6-OHDA,流动相是:25mM柠檬酸,125mM磷酸钠(文献中写的是sodium phosphate),100mg/lEDTA,30mg/lSOS,配置好后用磷酸调节pH至2.5(我们实际操作中,比2.5高).

现有问题如下:

1.关于pH:我第一次检测的时候,调节pH至3.5,但是出峰时间随着时间的进行也向后推移了,而且是每进一针都向后退0.1-0.2分钟,推测可能是由于pH变化导致的,于是3天后又测那瓶流动相的pH为3.8,又过了三天再测变为4.2.可是我第二次测时候,当天做完实验测得pH值和我第二天早上测得pH值几乎没有变化!于是我又迷茫了!莫名奇妙。于是又找其他原因。

2.我用sodium phosphate,瓶子上写的是这个,但是化学式是磷酸二氢钠。但是就缓冲对来说,是不是没有太大影响?另外在配置流动相的时候有没有什么注意事项?比如操作有没有什么规定?(我是先放柠檬酸,再放磷酸二氢钠,然后让EDTA,最后放SOS,倒入蒸馏水定容至1升,然后调节pH,不知道是不是操作有问题?)
多谢
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