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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)

[求助] 这个大峰是溶剂峰吗,为什么会这么的大?请教大家!

这个超大的峰难道是传说中的溶剂峰或鬼峰吗!??

小弟做的实验主要是测酶活和抑制剂对酶的抑制效果,流动相:0.8%乙腈,20mM三乙胺,用醋酸调PH到6.0,波长259nm。

第一天测的样品很正常,几个峰都能分开,产物出峰时间在6.3min左右。



但是第二天,在酶反应体系中加入了极少量的DMSO后,就在3.3min左右出现了一个非常大的峰,很怪异!我测过,DMSO在259nm波长处基本上是无吸收的,我重复了很多次,这个峰一直都出现。



这个突然出现的大峰是溶剂峰吗,为什么会这么的大,这个峰的出现导致我的检测的结果很不准确,产物出的峰都成山丘一样凸起来的了,根本就不是尖的,大伙帮我看看是怎么回事吧。

[ Last edited by yzhlasiI on 2011-5-26 at 18:23 ]
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破土草儿

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yzhlasiI at 2011-05-27 17:34:38:
这位兄台说的有道理,我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物,1+2---->峰3,但是反应10分钟后,我用沸水煮了10分钟,使酶失活终止反应了,所以按道理,这个反应不能继续进行了。

关于图2,为什么 ...

你能够把图一中峰3的化学式贴出来吗?虽然你的酶反应体系终止了,不能保证体系氧化进行呀?我按照你的理解,你是加热灭活之后,再加抑制剂!这个有意思吗?难道图2是抑制剂的峰?但是解释不通图一中峰3为什么减少?我怀疑是峰3氧化变成了图二中的峰一。如果是柱子的问题,那我建议你冲洗一下柱子,再做一下,如果还是这个结果!那肯定是反应体系的问题!
10楼2011-05-27 18:53:37
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xiaoxiao270

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你确定DMSO在259没有吸收,你可以进一针被稀释的DMSO,我以前用210nm时DMSO峰很大
分离、分离
2楼2011-05-26 22:38:23
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

液相条件呢?
DMSO有时候基线不太好,但不会出现这样的溶剂峰。俺270nm液相DMSO无问题。
守候在风中的宁静。
3楼2011-05-26 22:42:32
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


karl2100(金币+1): 谢谢回复! 2011-05-27 18:05:51
3.3min左右出现了一个非常大的峰

DMSO对保留时间有影响,3.3m可能为某主峰。。
守候在风中的宁静。
4楼2011-05-26 22:45:33
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