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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » 这个大峰是溶剂峰吗，为什么会这么的大？请教大家！
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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)

[求助] 这个大峰是溶剂峰吗，为什么会这么的大？请教大家！

这个超大的峰难道是传说中的溶剂峰或鬼峰吗！？？

小弟做的实验主要是测酶活和抑制剂对酶的抑制效果，流动相：0.8%乙腈，20mM三乙胺，用醋酸调PH到6.0，波长259nm。

第一天测的样品很正常，几个峰都能分开，产物出峰时间在6.3min左右。



但是第二天，在酶反应体系中加入了极少量的DMSO后，就在3.3min左右出现了一个非常大的峰，很怪异！我测过，DMSO在259nm波长处基本上是无吸收的，我重复了很多次，这个峰一直都出现。



这个突然出现的大峰是溶剂峰吗，为什么会这么的大，这个峰的出现导致我的检测的结果很不准确，产物出的峰都成山丘一样凸起来的了，根本就不是尖的，大伙帮我看看是怎么回事吧。

[ Last edited by yzhlasiI on 2011-5-26 at 18:23 ]
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1楼2011-05-26 17:34:43
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xiaoxiao270

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你确定DMSO在259没有吸收，你可以进一针被稀释的DMSO，我以前用210nm时DMSO峰很大
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分离、分离
2楼2011-05-26 22:38:23
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

液相条件呢？
DMSO有时候基线不太好，但不会出现这样的溶剂峰。俺270nm液相DMSO无问题。
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守候在风中的宁静。
3楼2011-05-26 22:42:32
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢回复！ 2011-05-27 18:05:51
3.3min左右出现了一个非常大的峰

DMSO对保留时间有影响，3.3m可能为某主峰。。
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守候在风中的宁静。
4楼2011-05-26 22:45:33
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yangqiang10

金虫 (正式写手)

林风

【答案】应助回帖

我以前做过  其他的 产品中加入DMSO后影响比较大  而且基线不是很稳定
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一切皆有可能
5楼2011-05-26 23:09:21
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破土草儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

yzhlasiI(金币+1): 非常感谢！ 2011-05-27 17:34:16
绝对不是溶剂峰，溶剂峰有一个特点，峰顶像“扫把"一样一样不规则！按照你的描述，结合图，我来解释你的反应的现象。图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，经过一天之后，底物越来越少，都转化为图一中的峰3，峰3在反应体系中，又不断转化为图峰2的峰1产物（产物的量不断增多）。从你以上图片可以分析得到，反应体系中各个产物的母核结构变化不大（尤其图一的峰3和图二的峰1之间），只不过图二的峰1产物的极性变大了！恭喜lZ，你这个发现可能就是一篇很好的paper。一个新的实验发现！当然不排除你实验设计有不合理的地方，比如反应体系不稳定，导致反应持续进行，希望LZ好好研究！
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6楼2011-05-26 23:18:07
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yamisr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

反应终止了么？ 如果是溶剂峰的  不好解释 峰3在减小啊

可能是产物的一个变化体
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众生度尽方证菩提,地狱未空誓不成佛……
7楼2011-05-27 00:16:20
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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 破土草儿 at 2011-05-26 23:18:07:
绝对不是溶剂峰，溶剂峰有一个特点，峰顶像“扫把"一样一样不规则！按照你的描述，结合图，我来解释你的反应的现象。图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，经过一天之后，底物越来越少，都转化为图一中 ...

这位兄台说的有道理，我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，但是反应10分钟后，我用沸水煮了10分钟，使酶失活终止反应了，所以按道理，这个反应不能继续进行了。

关于图2，为什么加DMSO,是因为我要加入酶抑制剂，看抑制剂的抑制效果，而那些小分子抑制剂都是溶解在DMSO里面的，加入DMSO或者抑制剂后，这个大峰就出现了。
这个问题我一直不知道是为什么，因为我换柱子后，这个大峰就消失了，我只能认为是柱子的原因，因为我用的是伊力特C18的柱子，这个柱子的流动相里面有机相含量最好是不能少于10%的，而我的流动相里面的有机相几乎为0，因为加入有机相后几个峰会连在一起而分不开，所以只能减少有机相的含量，现在用的是安捷伦TC-C18(2)的柱子，流动相里面加入了5%的甲醇，虽然能做出来，但是重复性不是很好，我这个星期实验了再和大家交流下啊。
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8楼2011-05-27 17:34:38
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yzhlasiI

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 痴夷子皮 at 2011-05-26 22:42:32:
液相条件呢？
DMSO有时候基线不太好，但不会出现这样的溶剂峰。俺270nm液相DMSO无问题。

这个实验师兄以前做过了的，DMSO加入后不会出现那个奇怪的峰，而且DMSO也不会参与这个反应啊，我是重复师兄以前做过的实验，流动相和体系都是按照师兄的来的，我在想这个会不会因为我的流动相里面的有机相含量太低，水分含量太高，结果把柱子里面的填料给冲出来了啊？
C18的柱子流动相里面的水的含量最低能是多少啊？

我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，但是反应10分钟后，我用沸水煮了10分钟，使酶失活终止反应了，所以按道理，这个反应不能继续进行了。

关于图2，为什么加DMSO,是因为我要加入酶抑制剂，看抑制剂的抑制效果，而那些小分子抑制剂都是溶解在DMSO里面的，加入DMSO或者抑制剂后，这个大峰就出现了。
这个问题我一直不知道是为什么，因为我换柱子后，这个大峰就消失了，我只能认为是柱子的原因，因为我用的是伊力特C18的柱子，这个柱子的流动相里面有机相含量最好是不能少于10%的，而我的流动相里面的有机相几乎为0，因为加入有机相后几个峰会连在一起而分不开，所以只能减少有机相的含量，现在用的是安捷伦TC-C18(2)的柱子，流动相里面加入了5%的甲醇，虽然能做出来，但是重复性不是很好，我这个星期实验了再和大家交流下啊。
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9楼2011-05-27 17:38:22
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破土草儿

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yzhlasiI at 2011-05-27 17:34:38:
这位兄台说的有道理，我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，但是反应10分钟后，我用沸水煮了10分钟，使酶失活终止反应了，所以按道理，这个反应不能继续进行了。

关于图2，为什么 ...

你能够把图一中峰3的化学式贴出来吗？虽然你的酶反应体系终止了，不能保证体系氧化进行呀？我按照你的理解，你是加热灭活之后，再加抑制剂！这个有意思吗？难道图2是抑制剂的峰？但是解释不通图一中峰3为什么减少？我怀疑是峰3氧化变成了图二中的峰一。如果是柱子的问题，那我建议你冲洗一下柱子，再做一下，如果还是这个结果！那肯定是反应体系的问题！
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10楼2011-05-27 18:53:37
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