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这个大峰是溶剂峰吗，为什么会这么的大？请教大家！
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这个超大的峰难道是传说中的溶剂峰或鬼峰吗！？？ 小弟做的实验主要是测酶活和抑制剂对酶的抑制效果，流动相：0.8%乙腈，20mM三乙胺，用醋酸调PH到6.0，波长259nm。 第一天测的样品很正常，几个峰都能分开，产物出峰时间在6.3min左右。  但是第二天，在酶反应体系中加入了极少量的DMSO后，就在3.3min左右出现了一个非常大的峰，很怪异！我测过，DMSO在259nm波长处基本上是无吸收的，我重复了很多次，这个峰一直都出现。  这个突然出现的大峰是溶剂峰吗，为什么会这么的大，这个峰的出现导致我的检测的结果很不准确，产物出的峰都成山丘一样凸起来的了，根本就不是尖的，大伙帮我看看是怎么回事吧。 [ Last edited by yzhlasiI on 2011-5-26 at 18:23 ] |
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这位兄台说的有道理，我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，但是反应10分钟后，我用沸水煮了10分钟，使酶失活终止反应了，所以按道理，这个反应不能继续进行了。 关于图2，为什么加DMSO,是因为我要加入酶抑制剂，看抑制剂的抑制效果，而那些小分子抑制剂都是溶解在DMSO里面的，加入DMSO或者抑制剂后，这个大峰就出现了。 这个问题我一直不知道是为什么，因为我换柱子后，这个大峰就消失了，我只能认为是柱子的原因，因为我用的是伊力特C18的柱子，这个柱子的流动相里面有机相含量最好是不能少于10%的，而我的流动相里面的有机相几乎为0，因为加入有机相后几个峰会连在一起而分不开，所以只能减少有机相的含量，现在用的是安捷伦TC-C18(2)的柱子，流动相里面加入了5%的甲醇，虽然能做出来，但是重复性不是很好，我这个星期实验了再和大家交流下啊。 |
8楼2011-05-27 17:34:38
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这个实验师兄以前做过了的，DMSO加入后不会出现那个奇怪的峰，而且DMSO也不会参与这个反应啊，我是重复师兄以前做过的实验，流动相和体系都是按照师兄的来的，我在想这个会不会因为我的流动相里面的有机相含量太低，水分含量太高，结果把柱子里面的填料给冲出来了啊？ C18的柱子流动相里面的水的含量最低能是多少啊？ 我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物，1+2---->峰3，但是反应10分钟后，我用沸水煮了10分钟，使酶失活终止反应了，所以按道理，这个反应不能继续进行了。 关于图2，为什么加DMSO,是因为我要加入酶抑制剂，看抑制剂的抑制效果，而那些小分子抑制剂都是溶解在DMSO里面的，加入DMSO或者抑制剂后，这个大峰就出现了。 这个问题我一直不知道是为什么，因为我换柱子后，这个大峰就消失了，我只能认为是柱子的原因，因为我用的是伊力特C18的柱子，这个柱子的流动相里面有机相含量最好是不能少于10%的，而我的流动相里面的有机相几乎为0，因为加入有机相后几个峰会连在一起而分不开，所以只能减少有机相的含量，现在用的是安捷伦TC-C18(2)的柱子，流动相里面加入了5%的甲醇，虽然能做出来，但是重复性不是很好，我这个星期实验了再和大家交流下啊。 |
9楼2011-05-27 17:38:22