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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做蛋白体外表达时的引物设计问题！
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wuzuobin125 at 2011-05-25 16:38:13:
天使托已经说的很明白了，设计引物不一定非要从你给的序列的第一个碱基开始的，你可以在前面加上一些保护碱基或是酶切位点的，基因转录翻译的时候，氨基酸是不受你在前面加上去的碱基影响的，还是会从你给的序列的 ...

可是老师加的那个A并不是什么保护碱基啊，我的蛋白有信号肽的，成熟蛋白从ATC开始，A(ATCACC……前一个A是在cDNA上的，老师设计的引物是保护碱基+酶切位点+保护碱基+AATCACC……那我就怕到时候体外表达的时候给我从AAT开始表达，那出来的蛋白不就不对了！
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11楼2011-05-25 16:47:39
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ZzzZdota

银虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的问题我感觉融合蛋白翻译的时候是从载体的ATG开始的 然后你设计引物的时候是不是应该在你的ATC前面加上3的倍数个碱基就可以了 吧  这样就保证你要的蛋白能够正常表达了。
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12楼2011-12-02 18:35:26
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by ZzzZdota at 2011-12-02 18:35:26:
我也遇到了同样的问题我感觉融合蛋白翻译的时候是从载体的ATG开始的 然后你设计引物的时候是不是应该在你的ATC前面加上3的倍数个碱基就可以了 吧  这样就保证你要的蛋白能够正常表达了。

一般融合蛋白表达都是采用载体上的起始密码子，你把你的序列连入载体以后，只要保证你的开放阅读框不发生移码突变就可以了。
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13楼2011-12-06 10:51:20
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