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friya0910

新虫 (正式写手)

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专业: 作物分子育种

[求助] 做蛋白体外表达时的引物设计问题！

1 ATCACTCCTC ACACCCTAAA CTCCCATTCT TACCAGCTCT CCTTCCATGG CTCGCTCCTC
61 CGCCGTCTGC TTCCTCCTCC TCCTCGCCTT CCTCATTGGC ACAGCCTCGG CA(ATCACCTG
121 TGGTCAGGTT GACTCTGACC TCACCTCCTG CCTTGGCTAT GCTAGAAAGG GCGGGGTCAT
181 CCCACCGGGC TGCTGCGCGG GTGTGAGGAC CCTTAACAAC TTAGCCAAGA CCACTCCTGA
241 TCGCCAGACT GCATGCAACT GCCTCAAGTC TCTGGTGAAC CCCAGCCTTG GCCTCAATGC
301 TGCTATCGTC GCCGGCATCC CCGGCAAGTG CGGCGTCAAC ATCCCCTACC CGATCAGCAT
361 GCAGACTGAT TGCAACAAGG TGAGGTAA)AT CTCCGTATGG AGCCTACTGC TGGTACTGCG
421 CATCTGCTGG TTTTATTATT AGTACTACTT GGTCGGAGCG GCGGGAATAA AAGACGCTTC
481 ATTCACCAAT GTTTGGTTTG TGAACCAGTT TGCGGTGTTG TAGTCTTCTG TTTCAGCTAA
541 TGATGTTACA TTTTAGACTC TCATTATCTT CGATGGTGGG GTCTGTAGCA TTGTAATAAA
601 ATTATGTTAT GTTATGAAAT TTGAGTTTTT TCCTTGGTAA AAAAAAAAAA
以上是cDNA序列，括号中的是表达成熟蛋白的序列，现在想做蛋白的体外表达，该怎么设计引物啊？是不是一定要在括号的两端设计啊？这样会很受局限的吧！

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1楼 2011-05-23 15:43:26

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friya0910

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by wuzuobin125 at 2011-05-25 16:38:13:
天使托已经说的很明白了，设计引物不一定非要从你给的序列的第一个碱基开始的，你可以在前面加上一些保护碱基或是酶切位点的，基因转录翻译的时候，氨基酸是不受你在前面加上去的碱基影响的，还是会从你给的序列的 ...

可是老师加的那个A并不是什么保护碱基啊，我的蛋白有信号肽的，成熟蛋白从ATC开始，A(ATCACC……前一个A是在cDNA上的，老师设计的引物是保护碱基+酶切位点+保护碱基+AATCACC……那我就怕到时候体外表达的时候给我从AAT开始表达，那出来的蛋白不就不对了！