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friya0910

新虫 (正式写手)

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专业: 作物分子育种

[求助] 做蛋白体外表达时的引物设计问题！

1 ATCACTCCTC ACACCCTAAA CTCCCATTCT TACCAGCTCT CCTTCCATGG CTCGCTCCTC
61 CGCCGTCTGC TTCCTCCTCC TCCTCGCCTT CCTCATTGGC ACAGCCTCGG CA(ATCACCTG
121 TGGTCAGGTT GACTCTGACC TCACCTCCTG CCTTGGCTAT GCTAGAAAGG GCGGGGTCAT
181 CCCACCGGGC TGCTGCGCGG GTGTGAGGAC CCTTAACAAC TTAGCCAAGA CCACTCCTGA
241 TCGCCAGACT GCATGCAACT GCCTCAAGTC TCTGGTGAAC CCCAGCCTTG GCCTCAATGC
301 TGCTATCGTC GCCGGCATCC CCGGCAAGTG CGGCGTCAAC ATCCCCTACC CGATCAGCAT
361 GCAGACTGAT TGCAACAAGG TGAGGTAA)AT CTCCGTATGG AGCCTACTGC TGGTACTGCG
421 CATCTGCTGG TTTTATTATT AGTACTACTT GGTCGGAGCG GCGGGAATAA AAGACGCTTC
481 ATTCACCAAT GTTTGGTTTG TGAACCAGTT TGCGGTGTTG TAGTCTTCTG TTTCAGCTAA
541 TGATGTTACA TTTTAGACTC TCATTATCTT CGATGGTGGG GTCTGTAGCA TTGTAATAAA
601 ATTATGTTAT GTTATGAAAT TTGAGTTTTT TCCTTGGTAA AAAAAAAAAA
以上是cDNA序列，括号中的是表达成熟蛋白的序列，现在想做蛋白的体外表达，该怎么设计引物啊？是不是一定要在括号的两端设计啊？这样会很受局限的吧！

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1楼 2011-05-23 15:43:26

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friya0910

新虫 (正式写手)

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引用回帖:

12楼: Originally posted by ZzzZdota at 2011-12-02 18:35:26:
我也遇到了同样的问题我感觉融合蛋白翻译的时候是从载体的ATG开始的然后你设计引物的时候是不是应该在你的ATC前面加上3的倍数个碱基就可以了吧这样就保证你要的蛋白能够正常表达了。

一般融合蛋白表达都是采用载体上的起始密码子，你把你的序列连入载体以后，只要保证你的开放阅读框不发生移码突变就可以了。