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friya0910

新虫 (正式写手)

[求助] 做蛋白体外表达时的引物设计问题!

1 ATCACTCCTC ACACCCTAAA CTCCCATTCT TACCAGCTCT CCTTCCATGG CTCGCTCCTC
     61 CGCCGTCTGC TTCCTCCTCC TCCTCGCCTT CCTCATTGGC ACAGCCTCGG CA(ATCACCTG
    121 TGGTCAGGTT GACTCTGACC TCACCTCCTG CCTTGGCTAT GCTAGAAAGG GCGGGGTCAT
    181 CCCACCGGGC TGCTGCGCGG GTGTGAGGAC CCTTAACAAC TTAGCCAAGA CCACTCCTGA
    241 TCGCCAGACT GCATGCAACT GCCTCAAGTC TCTGGTGAAC CCCAGCCTTG GCCTCAATGC
    301 TGCTATCGTC GCCGGCATCC CCGGCAAGTG CGGCGTCAAC ATCCCCTACC CGATCAGCAT
    361 GCAGACTGAT TGCAACAAGG TGAGGTAA)AT CTCCGTATGG AGCCTACTGC TGGTACTGCG
    421 CATCTGCTGG TTTTATTATT AGTACTACTT GGTCGGAGCG GCGGGAATAA AAGACGCTTC
    481 ATTCACCAAT GTTTGGTTTG TGAACCAGTT TGCGGTGTTG TAGTCTTCTG TTTCAGCTAA
    541 TGATGTTACA TTTTAGACTC TCATTATCTT CGATGGTGGG GTCTGTAGCA TTGTAATAAA
    601 ATTATGTTAT GTTATGAAAT TTGAGTTTTT TCCTTGGTAA AAAAAAAAAA
以上是cDNA序列,括号中的是表达成熟蛋白的序列,现在想做蛋白的体外表达,该怎么设计引物啊?是不是一定要在括号的两端设计啊?这样会很受局限的吧!
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by ZzzZdota at 2011-12-02 18:35:26:
我也遇到了同样的问题我感觉融合蛋白翻译的时候是从载体的ATG开始的 然后你设计引物的时候是不是应该在你的ATC前面加上3的倍数个碱基就可以了 吧  这样就保证你要的蛋白能够正常表达了。

一般融合蛋白表达都是采用载体上的起始密码子,你把你的序列连入载体以后,只要保证你的开放阅读框不发生移码突变就可以了。
13楼2011-12-06 10:51:20
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friya0910

新虫 (正式写手)

自己顶一下,希望有高人指点啊!着急……
2楼2011-05-23 15:44:11
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖


amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-05-23 20:17:58
friya0910(金币+1): 2011-05-25 09:28:24
设计引物是看你将表达蛋白的那段序列往什么表达载体上连接了。。。载体不同,当然酶切位点是不一样的。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-05-23 16:31:07
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deblway

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-05-23 20:18:04
friya0910(金币+2): 2011-05-25 09:28:19
貌似表达成熟蛋白的话,引物Binding部分你没别的选择吧?你在别的位置设计引物好像不能出来你的成熟蛋白吧。。。至于酶切位点,根据需要添加上即可。。
海贼王!哥当定了。。。。
4楼2011-05-23 16:53:18
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