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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-23 20:17:43
friya0910(金币+10): 2011-05-25 09:29:43
你这问题问的,累得半死终于发现你Upper引物的酶切位点是NcoI。
哥们,酶切位点只加前面就可以了,后面的不用加。Lower引物的酶切位点是BamHI,同样只加前面的保护碱基,后面的去掉。鄙人不才,修改你的引物如下:
Upper:5'atccatggAATCACCTGTGGTCAGGTTG 3'
Lower:5'cgcggatccGAGATTTACCTCACCTTG 3'
PCR程序如下;
95 5min
95 30s
56 30s
72 1kb/min      5cycles
95 30s
60 30s
72 1kb/min      30cycles
72 10min
4   hold
如果你坚持不想改引物,那你用以下程序试试:
95 5min
95 30s
56 30s
72 1kb/min      5cycles
95 30s
62 30s
72 1kb/min      30cycles
72 10min
4   hold
姑且一试吧,建议修改引物,好运
2楼2011-05-23 16:41:51
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