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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶纯化后的保存问题
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jyh024

木虫 (正式写手)

[求助] 酶纯化后的保存问题

我现在测定酶活，在异元表达及镍柱纯化后如何保存酶才能尽可能的保留其活性？？一般如何选择缓冲液？PBS还是Tris？分子克隆上说磷酸盐缓冲液在超低温时pH变化很大，而Tris号称又会干扰到酶活的测定，真不知该如何选择缓冲液了；还有4℃，-20℃及-80℃哪个温度好？越低越好？我害怕冷冻会伤害酶，可是放4℃又有沉淀析出，真郁闷。请大侠们帮帮忙。
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1楼 2011-05-21 16:58:20
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jia1012428

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

jyh024(金币+1): 2011-05-24 08:58:38
看柱子或填料说明书！
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2楼2011-05-23 12:52:47
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多糖acid

金虫 (小有名气)

boat

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, EPI+1): 鼓励交流，欢迎常来生物综合版 2011-05-23 18:24:05
jyh024(金币+5): 谢谢 2011-05-24 08:59:20
对于酶的纯化 建议你不要过柱子 这样浪费时间又得到的纯品少，用等电点把不同分子量的酶给分离开，在用冷冻离心机把酶给分离出来，这样快而且酶还不失活。试一试吧。
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付出就有回报
3楼2011-05-23 13:47:48
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看天

木虫 (知名作家)
请将剩余金币退还
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2011-06-01 09:07:16
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)
Tris的PH随温度变化很大，磷酸应该还好。是酶的话，往缓冲液加点Mg离子，也可以考虑加适当的甘油。-80度冻存。
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5楼2011-06-01 12:23:53
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