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jyh024

木虫 (正式写手)

[求助] 酶纯化后的保存问题

我现在测定酶活,在异元表达及镍柱纯化后如何保存酶才能尽可能的保留其活性??一般如何选择缓冲液?PBS还是Tris?分子克隆上说磷酸盐缓冲液在超低温时pH变化很大,而Tris号称又会干扰到酶活的测定,真不知该如何选择缓冲液了;还有4℃,-20℃及-80℃哪个温度好?越低越好?我害怕冷冻会伤害酶,可是放4℃又有沉淀析出,真郁闷。请大侠们帮帮忙。
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看天

木虫 (知名作家)

请将剩余金币退还
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
4楼2011-06-01 09:07:16
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jia1012428

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

jyh024(金币+1): 2011-05-24 08:58:38
看柱子或填料说明书!
2楼2011-05-23 12:52:47
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多糖acid

金虫 (小有名气)

boat

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, EPI+1): 鼓励交流,欢迎常来生物综合版 2011-05-23 18:24:05
jyh024(金币+5): 谢谢 2011-05-24 08:59:20
对于酶的纯化 建议你不要过柱子 这样浪费时间又得到的纯品少,用等电点把不同分子量的酶给分离开,在用冷冻离心机把酶给分离出来,这样快而且酶还不失活。试一试吧。
付出就有回报
3楼2011-05-23 13:47:48
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

Tris的PH随温度变化很大,磷酸应该还好。是酶的话,往缓冲液加点Mg离子,也可以考虑加适当的甘油。-80度冻存。
5楼2011-06-01 12:23:53
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