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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cjjsdau

木虫 (职业作家)

[求助] 酶透析

最近粗提昆虫酶液,最后放入缓冲液中透析,连续两次都是有沉淀出现,有遇到这种情况的吗?请问如何解决?
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拜托,我的头像不是大苍蝇,这叫松阿扁叶峰
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

cjjsdau(金币+1): 2011-05-17 20:39:44
cjjsdau(金币+5): 2011-05-18 08:41:18
引用回帖:
Originally posted by cjjsdau at 2011-05-17 15:11:21:
谢谢,我是根据实验室常用的方法做的,先用0.2mM磷酸缓冲液研磨虫子,静提一会后8000r离心30min,取上清加固体硫酸铵至饱和度35%,冰浴静置30min,然后再离心30min,收集沉淀加缓冲液溶解,转至透析袋透析,透 ...

为什么透析要用0.02mM的buffer?
这个地方沉淀,一个可能就是你盐浓度低,离子化作用弱,导致沉淀,还有一个可能就是你的蛋白等电点就在这附近。
4楼2011-05-17 15:48:39
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

cjjsdau(金币+1): 2011-05-17 15:07:34
你看看你的酶的等电点,pH,以及盐浓度是不是透析前后差很多
你这个浓度应该不高,你加一点甘油试一试
多提供一点信息
2楼2011-05-17 15:00:56
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cjjsdau

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-05-17 15:00:56:
你看看你的酶的等电点,pH,以及盐浓度是不是透析前后差很多
你这个浓度应该不高,你加一点甘油试一试
多提供一点信息

谢谢,我是根据实验室常用的方法做的,先用0.2mM磷酸缓冲液研磨虫子,静提一会后8000r离心30min,取上清加固体硫酸铵至饱和度35%,冰浴静置30min,然后再离心30min,收集沉淀加缓冲液溶解,转至透析袋透析,透析液是0.02mM磷酸缓冲液,按理说不应该有沉淀,可是我做了两次还是有沉淀,不知道哪出错了
拜托,我的头像不是大苍蝇,这叫松阿扁叶峰
3楼2011-05-17 15:11:21
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cjjsdau

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-05-17 15:48:39:
为什么透析要用0.02mM的buffer?
这个地方沉淀,一个可能就是你盐浓度低,离子化作用弱,导致沉淀,还有一个可能就是你的蛋白等电点就在这附近。

恩,可能是昆虫个体间差异有些大,不能完全按照以前他们做的方法
拜托,我的头像不是大苍蝇,这叫松阿扁叶峰
5楼2011-05-17 15:51:50
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