24小时热门版块排行榜    

查看: 907  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cjjsdau

木虫 (职业作家)

[求助] 酶透析

最近粗提昆虫酶液,最后放入缓冲液中透析,连续两次都是有沉淀出现,有遇到这种情况的吗?请问如何解决?
回复此楼

» 猜你喜欢

拜托,我的头像不是大苍蝇,这叫松阿扁叶峰
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cjjsdau

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-05-17 15:00:56:
你看看你的酶的等电点,pH,以及盐浓度是不是透析前后差很多
你这个浓度应该不高,你加一点甘油试一试
多提供一点信息

谢谢,我是根据实验室常用的方法做的,先用0.2mM磷酸缓冲液研磨虫子,静提一会后8000r离心30min,取上清加固体硫酸铵至饱和度35%,冰浴静置30min,然后再离心30min,收集沉淀加缓冲液溶解,转至透析袋透析,透析液是0.02mM磷酸缓冲液,按理说不应该有沉淀,可是我做了两次还是有沉淀,不知道哪出错了
拜托,我的头像不是大苍蝇,这叫松阿扁叶峰
3楼2011-05-17 15:11:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

cjjsdau(金币+1): 2011-05-17 15:07:34
你看看你的酶的等电点,pH,以及盐浓度是不是透析前后差很多
你这个浓度应该不高,你加一点甘油试一试
多提供一点信息
2楼2011-05-17 15:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

cjjsdau(金币+1): 2011-05-17 20:39:44
cjjsdau(金币+5): 2011-05-18 08:41:18
引用回帖:
Originally posted by cjjsdau at 2011-05-17 15:11:21:
谢谢,我是根据实验室常用的方法做的,先用0.2mM磷酸缓冲液研磨虫子,静提一会后8000r离心30min,取上清加固体硫酸铵至饱和度35%,冰浴静置30min,然后再离心30min,收集沉淀加缓冲液溶解,转至透析袋透析,透 ...

为什么透析要用0.02mM的buffer?
这个地方沉淀,一个可能就是你盐浓度低,离子化作用弱,导致沉淀,还有一个可能就是你的蛋白等电点就在这附近。
4楼2011-05-17 15:48:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cjjsdau

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-05-17 15:48:39:
为什么透析要用0.02mM的buffer?
这个地方沉淀,一个可能就是你盐浓度低,离子化作用弱,导致沉淀,还有一个可能就是你的蛋白等电点就在这附近。

恩,可能是昆虫个体间差异有些大,不能完全按照以前他们做的方法
拜托,我的头像不是大苍蝇,这叫松阿扁叶峰
5楼2011-05-17 15:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +5 田洪有 2026-03-26 5/250 2026-03-26 15:43 by 无际的草原
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +13 adaie 2026-03-19 13/650 2026-03-26 14:05 by 小小麦片
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 085602 289分求调剂 +7 WWW西西弗斯 2026-03-24 7/350 2026-03-25 14:28 by 3Strings
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 352求调剂 +3 大米饭! 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123!
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见