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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶透析
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cjjsdau

木虫 (职业作家)

[求助] 酶透析

最近粗提昆虫酶液，最后放入缓冲液中透析，连续两次都是有沉淀出现，有遇到这种情况的吗？请问如何解决？
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拜托，我的头像不是大苍蝇，这叫松阿扁叶峰
1楼 2011-05-17 14:33:18
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

cjjsdau(金币+1): 2011-05-17 15:07:34
你看看你的酶的等电点，pH，以及盐浓度是不是透析前后差很多
你这个浓度应该不高，你加一点甘油试一试
多提供一点信息
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2楼2011-05-17 15:00:56
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cjjsdau

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-05-17 15:00:56:
你看看你的酶的等电点，pH，以及盐浓度是不是透析前后差很多
你这个浓度应该不高，你加一点甘油试一试
多提供一点信息

谢谢，我是根据实验室常用的方法做的，先用0.2mM磷酸缓冲液研磨虫子，静提一会后8000r离心30min，取上清加固体硫酸铵至饱和度35%，冰浴静置30min，然后再离心30min，收集沉淀加缓冲液溶解，转至透析袋透析，透析液是0.02mM磷酸缓冲液，按理说不应该有沉淀，可是我做了两次还是有沉淀，不知道哪出错了
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拜托，我的头像不是大苍蝇，这叫松阿扁叶峰
3楼2011-05-17 15:11:21
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

cjjsdau(金币+1): 2011-05-17 20:39:44
cjjsdau(金币+5): 2011-05-18 08:41:18
引用回帖:
Originally posted by cjjsdau at 2011-05-17 15:11:21:
谢谢，我是根据实验室常用的方法做的，先用0.2mM磷酸缓冲液研磨虫子，静提一会后8000r离心30min，取上清加固体硫酸铵至饱和度35%，冰浴静置30min，然后再离心30min，收集沉淀加缓冲液溶解，转至透析袋透析，透 ...

为什么透析要用0.02mM的buffer？
这个地方沉淀，一个可能就是你盐浓度低，离子化作用弱，导致沉淀，还有一个可能就是你的蛋白等电点就在这附近。
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4楼2011-05-17 15:48:39
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cjjsdau

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-05-17 15:48:39:
为什么透析要用0.02mM的buffer？
这个地方沉淀，一个可能就是你盐浓度低，离子化作用弱，导致沉淀，还有一个可能就是你的蛋白等电点就在这附近。

恩，可能是昆虫个体间差异有些大，不能完全按照以前他们做的方法
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拜托，我的头像不是大苍蝇，这叫松阿扁叶峰
5楼2011-05-17 15:51:50
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gppwfh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

cjjsdau(金币+1): 2011-05-17 17:04:07
cjjsdau(金币+2): 2011-05-18 08:41:28
不能完全按照指导的做。你应该考虑蛋白等电点及盐浓度的问题。
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6楼2011-05-17 16:29:40
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