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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞融合融合率好低
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sisifly

新虫 (小有名气)

[求助] 细胞融合融合率好低

我上周五做了次细胞融合。。今天看了融合率好低不到10%。。我用的是自己配的PEG4000，50%。。。我融合时候作用时间有点长，，用了两分钟。。。我同学上次用了一分钟她融合率差不多60%。。。可是也不高啊。。各位大侠是怎么做到那个高的融合率的？。。。我身心憔悴啊。。
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1楼 2011-05-16 14:14:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lxh311

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
adslye(金币+3): 感谢应助~祝顺利！ 2011-08-12 10:26:25
silicare(BioEPI+1): 2011-08-12 16:00:26
引用回帖:
Originally posted by sisifly at 2011-05-16 14:14:16:
我上周五做了次细胞融合。。今天看了融合率好低不到10%。。我用的是自己配的PEG4000，50%。。。我融合时候作用时间有点长，，用了两分钟。。。我同学上次用了一分钟她融合率差不多60%。。。可是也不高啊。。各位大 ...

看了你的描述，我大概知道原因了，以下几点：
1.PEG最好是购买Sigma的，这是很关键的融合剂，特别是生手，我实在不敢恭维你配置的效果，做到熟练了再考虑自己配PEG；
2.PEG2000,4000,6000，分子量越大，越稠，毒性也越强，你要选择合适分子量的PEG，买sigma的，一般用0.8ml就够了；
3.融合时间的控制，一般为90s，不能太长，否则细胞因毒性大，而出现死亡，融合完，立即用1640培养基（不加FBS）终止融合，5min，前2min同融合时速度，后3min逐渐加快；
4.SP2/0的状态也一定要好，不然效率也不高；
5.本人只是有限，其它请其它大虾补充；
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心境心静
4楼2011-06-18 08:49:13
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢应助！祝顺利！ 2011-08-12 10:27:12
呵呵，这个问题我也碰到过。后来买了赛驰融合剂。效果非常好，做了两个单抗，两千多个孔大概有一千四百多个融合孔。只是后期筛选量大了点。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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8楼2011-07-30 19:58:49
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普通回帖

rocky3715

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-12 10:25:31
引用回帖:
Originally posted by sisifly at 2011-05-16 14:14:16:
我上周五做了次细胞融合。。今天看了融合率好低不到10%。。我用的是自己配的PEG4000，50%。。。我融合时候作用时间有点长，，用了两分钟。。。我同学上次用了一分钟她融合率差不多60%。。。可是也不高啊。。各位大 ...

我觉得楼主最好不要自己配置PEG吧，最后购买，那样较好，而且融合的时间这个很不好说，确实是不能太长，但是不同的人做的时候又不同的习惯，其实多做几次会好点儿，第一次做融合不好是正常的
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我们一起加油！！！
2楼2011-06-14 22:00:24
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juliana_zou11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-12 10:25:47
首先，融合率低不要紧，熟练了自然就高了，关键是你要能拿到东西。生手的话融合率低倒不是坏事，至少你处理的融合细胞的株数少了很多，筛选就可以精细一些
其次，PEG买的话的确不贵，尤其你是搞科研不是搞生产，就以sigma的那款来说买一盒可以做25次，一年你们能做25次？
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3楼2011-06-15 08:43:33
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chenyyy

无虫 (正式写手)
细胞状态   融合时间太长
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5楼2011-06-24 10:31:18
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wxf2133

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

融合后的细胞怎么培养  谢谢
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6楼2011-07-26 23:19:58
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 鼓励新虫交流~祝顺利！ 2011-08-12 10:26:56
也碰到类似的问题，不过我们用的PEG也不是sigma的，真有那么大影响吗？
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Orbetterit,orenjoyit!
7楼2011-07-30 19:41:35
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chenyyy

无虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

融合时间过长,中毒了......
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9楼2011-08-12 10:00:30
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华俊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxh311 at 2011-06-18 08:49:13
看了你的描述，我大概知道原因了，以下几点：
1.PEG最好是购买Sigma的，这是很关键的融合剂，特别是生手，我实在不敢恭维你配置的效果，做到熟练了再考虑自己配PEG；
2.PEG2000,4000,6000，分子量越大，越稠，毒 ...

时间很早了，还是想请问一下大仙，你说的融合时间90s，包括加PEG时间吗，还是指加完peg后静置时间呢？
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多一份快乐少一分烦恼！
10楼2015-08-13 17:23:46
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