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shiliushu44

金虫 (小有名气)


[交流] 细胞融合的具体操作过程及其注意事项

和做过细胞融合的各位虫友,交流一下细胞融合的操作过程奇迹注意事项,希望可以提高融合成功的可能性。我做过好多次融合了,但是最后都没有得到能稳定分泌特异性好的抗体的细胞株,有一次扩到大瓶培养时,竞争性还很好,但是长满全瓶时,竞争性就完全没有了,应该是特异性细胞生长性不好被挤掉死亡了。怎么做才能提高融合效率呢,谢谢各位!
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xcheng211

禁虫 (小有名气)


shiliushu44(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽

3楼2011-09-19 11:06:13
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shiliushu44(金币+1):谢谢参与
the best wishes to you ~~~
4楼2011-09-19 21:26:31
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shiliushu44(金币+1):谢谢参与
多问问老师
6楼2011-09-20 09:13:59
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)


★ ★
shiliushu44(金币+1):谢谢参与
shiliushu44(金币+5): 2011-09-20 14:50:27
xuanzhang(金币+1): 谢谢参与交流 2011-09-28 15:08:10
有一次扩到大瓶培养时,竞争性还很好,这个时候证明你那细胞还有分泌针对免疫原的抗体,但是最后没有了,什么细胞之间竞争抑制死亡了。所以在竞争性还很好的时候证明你那细胞是多克隆细胞,你要进行有限稀释,你首先吹大孔里细胞,然后记数100个左右的细胞,平均铺到96孔细胞培养板中,长个7天左右,然后在显微镜下观察,如果是单克隆,就只有一团细胞,如果多克隆就不只一团细胞,elisa检测阳性的,挑选单克隆进行扩大培养,就ok。
7楼2011-09-20 13:20:49
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)


有什么事情在继续进行交流。
8楼2011-09-20 13:21:36
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于清

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
路过,感觉7楼回的挺好,我是开看看细胞融合怎么做,我也不懂。
9楼2011-09-20 14:52:02
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cauczh

新虫 (小有名气)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
xuanzhang(金币+1): 谢谢参与交流! 2011-09-28 15:08:24
阳性丢失很正常,主要是融合后的杂交瘤不稳定,在分裂繁殖中会导致染色体丢失。建议选择活力好的瘤细胞,务必在瘤细胞生长对数期融合,这样得到阳性率高,更容易筛选出好的单抗!
10楼2011-09-21 12:09:04
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jfj_tj

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
xuanzhang(金币+1): 谢谢参与交流! 2011-09-28 15:08:41
做单抗过程中,阳性的杂交瘤细胞都不是很稳定,在六孔板的时候要是有竞争的话,就应该用有限稀释法进行亚克隆以获得单细胞株,这样的话阳性杂交瘤细胞被其他细胞竞争掉的可能性会小一点,筛选的过程中要多注意细胞生长!!
11楼2011-09-28 13:19:44
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tian123tq

金虫 (小有名气)


注意克隆化、冻存和复苏后时时监控,一般来说细胞不会那么不稳定
12楼2012-05-30 15:43:55
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简单回复
2011-09-18 22:48  
shiliushu44(金币+1):谢谢参与
祝福祝福
2011-09-19 22:59  
祝福祝福
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