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shiliushu44

金虫 (小有名气)

[交流] 细胞融合的具体操作过程及其注意事项

和做过细胞融合的各位虫友，交流一下细胞融合的操作过程奇迹注意事项，希望可以提高融合成功的可能性。我做过好多次融合了，但是最后都没有得到能稳定分泌特异性好的抗体的细胞株，有一次扩到大瓶培养时，竞争性还很好，但是长满全瓶时，竞争性就完全没有了，应该是特异性细胞生长性不好被挤掉死亡了。怎么做才能提高融合效率呢，谢谢各位！
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1楼 2011-09-18 21:45:44
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xcheng211

禁虫 (小有名气)
★
shiliushu44(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
3楼2011-09-19 11:06:13
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
shiliushu44(金币+1):谢谢参与
the best wishes to you ~~~
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4楼2011-09-19 21:26:31
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leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)
★
shiliushu44(金币+1):谢谢参与
多问问老师
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6楼2011-09-20 09:13:59
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
shiliushu44(金币+1):谢谢参与
shiliushu44(金币+5): 2011-09-20 14:50:27
xuanzhang(金币+1): 谢谢参与交流 2011-09-28 15:08:10
有一次扩到大瓶培养时，竞争性还很好，这个时候证明你那细胞还有分泌针对免疫原的抗体，但是最后没有了，什么细胞之间竞争抑制死亡了。所以在竞争性还很好的时候证明你那细胞是多克隆细胞，你要进行有限稀释，你首先吹大孔里细胞，然后记数100个左右的细胞，平均铺到96孔细胞培养板中，长个7天左右，然后在显微镜下观察，如果是单克隆，就只有一团细胞，如果多克隆就不只一团细胞，elisa检测阳性的，挑选单克隆进行扩大培养，就ok。
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7楼2011-09-20 13:20:49
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weigb503

铁杆木虫 (小有名气)
有什么事情在继续进行交流。
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8楼2011-09-20 13:21:36
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于清

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
路过，感觉7楼回的挺好，我是开看看细胞融合怎么做，我也不懂。
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9楼2011-09-20 14:52:02
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cauczh

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
xuanzhang(金币+1): 谢谢参与交流！ 2011-09-28 15:08:24
阳性丢失很正常，主要是融合后的杂交瘤不稳定，在分裂繁殖中会导致染色体丢失。建议选择活力好的瘤细胞，务必在瘤细胞生长对数期融合，这样得到阳性率高，更容易筛选出好的单抗！
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10楼2011-09-21 12:09:04
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jfj_tj

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
xuanzhang(金币+1): 谢谢参与交流！ 2011-09-28 15:08:41
做单抗过程中，阳性的杂交瘤细胞都不是很稳定，在六孔板的时候要是有竞争的话，就应该用有限稀释法进行亚克隆以获得单细胞株，这样的话阳性杂交瘤细胞被其他细胞竞争掉的可能性会小一点，筛选的过程中要多注意细胞生长！！
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11楼2011-09-28 13:19:44
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tian123tq

金虫 (小有名气)
注意克隆化、冻存和复苏后时时监控，一般来说细胞不会那么不稳定
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12楼2012-05-30 15:43:55
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简单回复
yingying15882楼
2011-09-18 22:48  
shiliushu44(金币+1):谢谢参与
祝福祝福
yingying15885楼
2011-09-19 22:59  
祝福祝福
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