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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体在PH10以上才能溶解 如何进一步纯化
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没有烟总有花

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体在PH10以上才能溶解 如何进一步纯化

蛋白用PET28a载体表达，形成包涵体，但是在纯化过程中,包涵体在PH12左右才能溶解，不能过镍柱，求助如何进行进一步的纯化？
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1楼 2011-05-14 14:46:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-16 08:55:19
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-16 00:20:39:
首次回复不能加附件

必须引用回复才能加附件，版主别怪我，我不会直接加附件。

用阴离子交换柱层析不知道可不可以，如果你的蛋白质等电点低于12，那就用pH12来溶解，层析时候起始缓冲液和洗脱液都用pH12，这样你的蛋白质就会被吸附，再随着离子强度增大而被洗脱下来。也可以用疏水层析，只不过不能使用硫酸铵，因为会生成氨水，可以用备用的盐。
下面传两个层析柱的说明书。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-05-16 00:26:53
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

没有烟总有花(金币+1): 谢谢 我试试看 2011-05-16 16:00:04
首次回复不能加附件
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-05-16 00:20:39
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