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zhl8101

银虫 (初入文坛)

[求助] 杀死微生物

我的实验是用纤维素酶水解纤维素,最后检测还原糖含量,但溶液中有微生物,它的生长要消耗糖,会影响我的检测结果。能不能加入一种化学物质杀死微生物,而不对酶产生影响?或者别的方法也行。
水解pH为5.5。
我说的水解就是单纯的酶水解,不是发酵。微生物只会降低我的糖含量。
谢谢了!
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

我还有些想法,不知道你们是不是已经做过了,就多嘴一下,别嫌我啰嗦,如果已经想到了就当我这帖是浮云放过了。
1、温度
    50度对于中温纤维素酶来说,30个小时有可能会失活,之前有没有做过这个酶的温度耐受性?为什么要选用这个温度?在同步糖化发酵中,酵母不能耐受50度的,最好是在30至35度下生长和发酵,也最好最高不高于40度,你这个实验目的是什么?如果只是想辨认这个酶是内切还是外切的话,那么温度可以不处于30-40度,假如后续实验还要用来做同步糖化发酵的话,建议考虑一下降低温度。你选择50度是不是因为这个酶在50度降解速度最快?
2、小麦秸秆
    预处理的时候不知道是不是酸碱处理和爆破,pH值必须处理好,用上缓冲液来溶解,以防止内部的酸碱物质不能及时释放出来,在纤维素降解的时候泡出来破坏了设定好的pH值。还有就是颗粒大小要够小。现在有些机构可以自己做预处理,多请教别人。当然如果是能购买来的话,就不用考虑这些了。
3、酶
    纯化过的还是自己筛选得到的微生物产的粗酶液?假如这个酶是β-葡萄糖苷酶,那么很可能不能降解纤维素,那么这个实验就不用做了,之前有没有什么实验能说明这个酶是不是β-葡萄糖苷酶?
4、过滤
    因为预处理小麦秸秆不能用0.22微米的滤膜过滤,所以可以先将酶和缓冲液过滤,与底物混合之后再调节pH值到5.5,调节的速度可以快一些,不耽误多少时间的。底物和酶的加入有可能会影响体系的pH值的,影响或多或少都会有,混合之前一定要保证pH值是自己所设定的。

反正30个小时不算太长,这个实验还是可以成功的。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
18楼2011-05-14 16:16:34
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springTT

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zhl8101(金币+1): 2011-05-13 15:09:01
反应前过滤除菌一下试试。。。
2楼2011-05-13 13:20:17
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newtime007

木虫 (正式写手)

成长的微生物

【答案】应助回帖

zhl8101(金币+1): 2011-05-13 15:08:53
你的酶解时间多长啊?还能等到微生物生产起来。如果你很在意的话进行无菌操作吧,溶液灭菌。
上善若水,水善利万物而不争
3楼2011-05-13 13:26:15
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zhl8101

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by springTT at 2011-05-13 13:20:17:
反应前过滤除菌一下试试。。。

能不能具体说说?谢谢
4楼2011-05-13 14:42:49
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