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zhl8101银虫 (初入文坛)
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杀死微生物
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我的实验是用纤维素酶水解纤维素，最后检测还原糖含量，但溶液中有微生物，它的生长要消耗糖，会影响我的检测结果。能不能加入一种化学物质杀死微生物，而不对酶产生影响？或者别的方法也行。 水解pH为5.5。 我说的水解就是单纯的酶水解，不是发酵。微生物只会降低我的糖含量。 谢谢了！ |
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12楼2011-05-13 19:01:48
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【答案】应助回帖
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scelab(金币+5, EPI+1): 热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2011-05-14 01:50:08
scelab(金币+5, EPI+1): 热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2011-05-14 01:50:08
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1、 pH值是5.5不算太酸，微生物肯定是能够生长的。 2、 30个小时其实也不一定算长，酶解实验我们用生淀粉酶降解过3天的，完全可以成功（见附件）。 3、 什么底物，是结晶纤维素还是CMC还是预处理甘蔗渣什么的，可溶不可溶？ 4、 温度多少？我们试过在40度降解三天的，最后看降解率。如果温度较高，那么微生物比较难生长，但温度太高酶容易失去活力，像50度放30个小时，大多数纤维素酶都会失活大半。这个问题也要注意。 5、 在反应体系中加入抗生素算是浪费，而且微生物那么多，不可能全都抑制完的。加有毒物质也对人不安全，我觉得还是将可溶的东西过滤除菌的好。如果底物不可溶，那就只将酶液过滤，最好用0.22微米的滤膜，用0.45微米的没那么保险。如果觉得过滤速度很慢，就将酶液离心好一些，先用0.45微米滤膜过滤，再用0.22微米的滤膜过滤，速度会较快。30个小时没必要用超净台，微生物主要是酶液里原本带有的，空气中的很少。 6、 酶解反应的时候要塞住瓶口，不然水分蒸发，微生物也会进去。 |
14楼2011-05-14 01:46:06
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【答案】应助回帖
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我还有些想法，不知道你们是不是已经做过了，就多嘴一下，别嫌我啰嗦，如果已经想到了就当我这帖是浮云放过了。 1、温度 50度对于中温纤维素酶来说，30个小时有可能会失活，之前有没有做过这个酶的温度耐受性？为什么要选用这个温度？在同步糖化发酵中，酵母不能耐受50度的，最好是在30至35度下生长和发酵，也最好最高不高于40度，你这个实验目的是什么？如果只是想辨认这个酶是内切还是外切的话，那么温度可以不处于30-40度，假如后续实验还要用来做同步糖化发酵的话，建议考虑一下降低温度。你选择50度是不是因为这个酶在50度降解速度最快？ 2、小麦秸秆 预处理的时候不知道是不是酸碱处理和爆破，pH值必须处理好，用上缓冲液来溶解，以防止内部的酸碱物质不能及时释放出来，在纤维素降解的时候泡出来破坏了设定好的pH值。还有就是颗粒大小要够小。现在有些机构可以自己做预处理，多请教别人。当然如果是能购买来的话，就不用考虑这些了。 3、酶 纯化过的还是自己筛选得到的微生物产的粗酶液？假如这个酶是β-葡萄糖苷酶，那么很可能不能降解纤维素，那么这个实验就不用做了，之前有没有什么实验能说明这个酶是不是β-葡萄糖苷酶？ 4、过滤 因为预处理小麦秸秆不能用0.22微米的滤膜过滤，所以可以先将酶和缓冲液过滤，与底物混合之后再调节pH值到5.5，调节的速度可以快一些，不耽误多少时间的。底物和酶的加入有可能会影响体系的pH值的，影响或多或少都会有，混合之前一定要保证pH值是自己所设定的。 反正30个小时不算太长，这个实验还是可以成功的。 |
18楼2011-05-14 16:16:34