应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物与T载体连不上 求助
52/1返回列表
查看: 4024  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] PCR产物与T载体连不上 求助

PCR产物与PMD-19 T载体连接 16度过夜
然后转化感受态细胞后挑单克隆 菌液PCR检测的结果全为假阳性 我的片段大小差不多200bp左右 这个实验重复了3次了 还是不行 我连接的体系为载体1ul DNA 4ul soultion I 5ul 用的是宝生物的连接试剂盒 感受态细胞换过一次 都是从公司买的 后来看网上说天根的感受态好不错 我就试了一下 发现还是假阳性 愁死了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2011-05-11 17:06:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

szylnl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good！我以前也差不多，不过Taq酶是一起加了的，95℃用5分钟。 2011-05-12 01:09:22
syn1985(金币+1): 谢谢 2011-05-12 09:13:31
前面都差不多，我做菌落PCR是先把引物和mix加好，然后用牙签挑一下单菌落，放在PCR管里搅一下，然后在PCR仪上设计一个95℃，10分钟的程序，之后再加上Taq酶，不知道你这样做会怎样。
赞一下(1人) 回复此楼
用百分之百的努力去做每件事
11楼2011-05-11 22:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

hnsdly

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

syn1985(金币+1): 谢谢 2011-05-11 21:03:35
多做几个对照，查找问题。
赞一下 回复此楼
2楼2011-05-11 17:15:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hnsdly at 2011-05-11 17:15:23:
多做几个对照，查找问题。

我这次打算将AMP IPTG X-GAL全换掉 要是这些换掉还有问题的话咋办
怎么作对照才好呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-11 17:24:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

glucidum

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-05-11 19:52:54
syn1985(金币+2): 谢谢 2011-05-11 21:03:58
你用的什么DNA聚合酶?高保真DNA聚合酶产物不能用做TA连接的。
不知道长出来的克隆多不多,如果挺多的话至少说明连接反应没有问题。问题出在你的片段上。
此外,要注意长出来的菌落是真的转化子，还是其他相同抗性菌的污染。确保各试剂没有相同抗性菌污染。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-11 17:39:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭