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shenhaiwang金虫 (小有名气)
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[求助]
求助!PCR扩增不出全长DNA序列怎么办?
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| 我在做PCR时,所用引物是根据整个阅读框设计的,扩增出来的DNA理论上应该是1000bp左右,但是扩增出来的只有171bp的DNA片段,从电泳图上看,扩增条带很亮,特异性也很好;测序后发现此扩增片段跟我所要全长序列的3'端能够完全比对,并且包含下游引物序列。貌似上游引物没有扩增出任何条带,只是下游引物的单引物扩增,多次改变退火温度,结果依然如此,我下一步该怎么办呢?急切希望各位虫友出手相助,指点迷津,吾感激不尽! |
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