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angel2536

金虫 (著名写手)

[求助] 跪求高手和有经验者,如何测量细胞外核苷酸浓度

   最近,需要检测一下细胞外的核苷酸浓度,想看下它们浓度与对照相比是否发生改变,如ATP、ADP、AMP及腺苷浓度改变。查了些资料,不知道用什么方法好。看了下,好像用高效液相色谱测量的较多些,不知能否检测到低含量的核苷酸及定量是否可靠。
  求助有经验者帮助解答下。
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i100sdu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

angel2536(金币+20): 非常感谢 2011-05-08 10:33:48
胞外核酸量比较少,估计比较难测。细胞在加入某些药物后,可能会发生核苷酸的泄露,造成细胞死亡。通常可以用ATP试剂盒检测细胞外的含量,如果要用液相检测的话,你可以参考这篇文献,Plagiochin E, an antifungal bis(bibenzyl), exerts its antifungal activity through mitochondrial dysfunction-induced reactive oxygen species accumulation in Candida albicans 。如果含量很低,不一定能检测到。
2楼2011-05-07 10:15:30
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angel2536

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by i100sdu at 2011-05-07 10:15:30:
胞外核酸量比较少,估计比较难测。细胞在加入某些药物后,可能会发生核苷酸的泄露,造成细胞死亡。通常可以用ATP试剂盒检测细胞外的含量,如果要用液相检测的话,你可以参考这篇文献,Plagiochin E, an antifunga ...

非常感谢你的帮助!
正常一般都是检测细胞内,但是我这个是想检测下细胞外酶对核苷酸的水解情况,所以要检测胞外的。
3楼2011-05-08 10:37:22
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angel2536

金虫 (著名写手)

4楼2011-05-12 14:54:52
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郭华21

铁虫 (初入文坛)

据说不能用跪求这种东东的...
21·我的足球,我做主
5楼2011-05-12 16:05:32
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angel2536

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 郭华21 at 2011-05-12 16:05:32:
据说不能用跪求这种东东的...

我好长时间不用求助了,当时求助叫心切,现在好像改不了了.....
6楼2011-05-13 08:44:45
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ins0mnia2010

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

angel2536(金币+30): 恩,非常感谢。冷冻浓缩可以尝试下 2011-06-30 10:47:20
胞外ATP,ADP的含量少,可以冻干浓缩后再进行HPLC检测,使用ATP反应试剂盒灵敏度高但毕竟是酶所以要严格控制外界条件。
我觉得楼主还是要从方案的可行性进行分析,ATP不会被细胞分泌到胞外吧,多来源于细胞损伤后的细胞泄漏,胞外酶本来就少,能偶联ATP反应的就更少了。不知道楼主怎么看
7楼2011-05-14 10:30:44
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