应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白
53/1返回列表
查看: 3384  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

[求助] Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白

本人用镍柱分离带有6个组氨酸标签的重组蛋白，缓冲液是20mM磷酸三钠、500mM氯化钠、10mM咪唑，洗脱缓冲液是250mM咪唑。经过几次层析后发现：我的目的蛋白都穿透了，没有挂住。。。请问大家，这是怎么回事呢？该咋办呢？谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-05-06 16:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

实验达人黄

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
22楼2015-08-14 16:52:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-05-09 19:05:52
老实人sdu3375(金币+2): 2011-05-12 10:17:32
我没理解你的穿透是哪种意思，呵呵
1，如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的，这是正常的，250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2，在10mM的情况下，蛋白就下来了，如果你的测序是正确的，那可能是蛋白的立体结构使His标签没有完全暴露在外，与Ni结合不紧密。
赞一下(1人) 回复此楼
一只小笨鸟，飞呀飞呀飞~
2楼2011-05-09 01:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老实人sdu3375

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-09 01:02:56:
我没理解你的穿透是哪种意思，呵呵
1，如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的，这是正常的，250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2，在10mM的情况下，蛋白就下来了，如果你的测序是正确的，那可能是蛋白的立体结构 ...

嗯，您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢？
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-09 09:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

老实人sdu3375(金币+3): 2011-05-12 10:17:39
引用回帖:
Originally posted by 老实人sdu3375 at 2011-05-09 09:10:05:
嗯，您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢？

可能与Ni柱的载样量有关系，只能挂住一定量的蛋白，剩下的都透过去了。
你们实验室还有人用Ni柱吗？问问他们载样量多大吧。
赞一下 回复此楼
一只小笨鸟，飞呀飞呀飞~
4楼2011-05-09 16:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭