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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
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794378428

银虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题

我的PCR纯化产物为什么pMD 19Tsimple连接不上啊，求指导
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1楼 2011-05-04 08:32:32
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
TA克隆，
1，不能用保真酶；扩增后得带A
2，连接最好能过夜，这样阳性得率高
3，PCR产物需要回收纯化，浓度足够高
这样基本能出来
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17楼2013-11-06 09:19:02
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 一条一金币，呵呵 2011-05-04 11:05:32
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:10
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:33
1：连接体系的问题，连接时间呢？
2：质粒和你的目的基因酶切是否完全?
3:感受态细胞又如何？
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-05-04 08:52:31
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 有道理 2011-05-04 11:05:48
酶如果正确的话，条件一定要合适啊，时间等。。
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无完人！
3楼2011-05-04 10:20:07
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liulinlin123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 对啊 2011-05-04 11:05:57
可以考虑一下 链接时增加热击  65度5min
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-05-04 10:30:56
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