【答案】应助回帖

等笨笨

11楼2011-04-30 10:58:04

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xiaoweiwei121

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【答案】应助回帖

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bla2009(金币+3): 2011-04-30 22:58:47
dhd997(金币+3): 欢迎交流哦 2011-05-03 13:29:53
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:36:05

那个5
偶也搞不明白
其他的bamhi 切的应该是切开了只看到一条带
不知道你质粒抽提用的什么方法，我以前也遇到过，不过我用试剂盒抽提之后，这种情况就没有了
如果两个酶离得很近的话，建议不要双酶切了，用bamhi 切然后回收再用EcorI 切再纯化

12楼2011-04-30 22:37:25

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bla2009

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Originally posted by xiaoweiwei121 at 2011-04-30 22:37:25:
那个5
偶也搞不明白
其他的bamhi 切的应该是切开了只看到一条带
不知道你质粒抽提用的什么方法，我以前也遇到过，不过我用试剂盒抽提之后，这种情况就没有了
如果两个酶离得很近的话，建议不要双酶切了，用 ...

我是用试剂盒提的质粒啊，不知道为什么会出现这样的情况。两个酶分开切的话，到最后载体的片段会不会太稀了？

等笨笨

13楼2011-04-30 23:00:56

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xiaoweiwei121

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Originally posted by bla2009 at 2011-04-30 23:00:56:
我是用试剂盒提的质粒啊，不知道为什么会出现这样的情况。两个酶分开切的话，到最后载体的片段会不会太稀了？

只要你的质粒浓度够大的话第一步切得多一点
浓度不是问题
我就是这么弄的

14楼2011-04-30 23:04:34

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空谷幽风

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你这是用同一管质粒切的还是用不同管质粒切得？

a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

15楼2011-05-03 13:08:13

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bla2009

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Originally posted by 空谷幽风 at 2011-05-03 13:08:13:
你这是用同一管质粒切的还是用不同管质粒切得？

都是不同管的质粒，但是是同时挑的克隆摇的菌提的

等笨笨

16楼2011-05-04 09:59:19

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空谷幽风

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dhd997(金币+5): good 2011-05-06 18:19:57

引用回帖:

Originally posted by bla2009 at 2011-05-04 09:59:19:
都是不同管的质粒，但是是同时挑的克隆摇的菌提的

1.有些质粒在某些感受态细胞里面扩增是不稳定的，从你的EcoRI单酶切图其实可以看出这几个条带大小是不一样的，因此你首先要确定哪个质粒条带大小（可以像你的第二图一样，分别做单酶切，但是要选用合适的marker，跑胶的时候带着完整的质粒一起跑）是正确的。
2.换几种不同的感受态把质粒重新转一下
3.把质粒测个序，不用全测，只用T7测一下就可以了，这条引物可以测完这个载体上的几乎所有的酶切位点，然后比对一下测序结果是否跟标准序列相同

a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

17楼2011-05-06 10:26:28

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shenhuxi107

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西瓜(金币+2): 是跑得很怪。大侠知道原因不？请教下哈~ 2011-05-08 01:39:47

这个电泳图跑的实在是不咋地！酶切鉴定的时候用不着放这么大量！不好说！

18楼2011-05-08 00:41:05

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keke0812

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dhd997(金币+2): good 2011-05-09 07:57:32

酶切时间的问题,太短没有切完全,太长酶会产生星活性