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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒单酶切出现两条带
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bla2009

铜虫 (小有名气)
不要意思打错字了，第二张右边是用BamHI单酶切
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等笨笨
11楼2011-04-30 10:58:04
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
bla2009(金币+3): 2011-04-30 22:58:47
dhd997(金币+3): 欢迎交流哦 2011-05-03 13:29:53
bla2009(金币+1): 2011-05-05 08:36:05
那个5
偶也搞不明白
其他的bamhi 切的 应该是切开了 只看到一条带
不知道你质粒抽提用的什么方法，我以前也遇到过，不过我用试剂盒抽提之后，这种情况就没有了
如果两个酶离得很近的话，建议不要双酶切了，用bamhi 切 然后回收 再用EcorI 切 再纯化
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12楼2011-04-30 22:37:25
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bla2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiaoweiwei121 at 2011-04-30 22:37:25:
那个5
偶也搞不明白
其他的bamhi 切的 应该是切开了 只看到一条带
不知道你质粒抽提用的什么方法，我以前也遇到过，不过我用试剂盒抽提之后，这种情况就没有了
如果两个酶离得很近的话，建议不要双酶切了，用 ...

我是用试剂盒提的质粒啊，不知道为什么会出现这样的情况。两个酶分开切的话，到最后载体的片段会不会太稀了？
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等笨笨
13楼2011-04-30 23:00:56
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

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【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by bla2009 at 2011-04-30 23:00:56:
我是用试剂盒提的质粒啊，不知道为什么会出现这样的情况。两个酶分开切的话，到最后载体的片段会不会太稀了？

只要你的质粒浓度够大的话 第一步切得多一点
浓度不是问题
我就是这么弄的
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14楼2011-04-30 23:04:34
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这是用同一管质粒切的还是用不同管质粒切得？
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
15楼2011-05-03 13:08:13
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bla2009

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-05-03 13:08:13:
你这是用同一管质粒切的还是用不同管质粒切得？

都是不同管的质粒，但是是同时挑的克隆摇的菌提的
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等笨笨
16楼2011-05-04 09:59:19
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-05-06 18:19:57
引用回帖:
Originally posted by bla2009 at 2011-05-04 09:59:19:
都是不同管的质粒，但是是同时挑的克隆摇的菌提的

1.有些质粒在某些感受态细胞里面扩增是不稳定的，从你的EcoRI单酶切图其实可以看出这几个条带大小是不一样的，因此你首先要确定哪个质粒条带大小（可以像你的第二图一样，分别做单酶切，但是要选用合适的marker，跑胶的时候带着完整的质粒一起跑）是正确的。
2.换几种不同的感受态把质粒重新转一下
3.把质粒测个序，不用全测，只用T7测一下就可以了，这条引物可以测完这个载体上的几乎所有的酶切位点，然后比对一下测序结果是否跟标准序列相同
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
17楼2011-05-06 10:26:28
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shenhuxi107

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 是跑得很怪。大侠知道原因不？请教下哈~ 2011-05-08 01:39:47
这个电泳图跑的实在是不咋地！酶切鉴定的时候用不着放这么大量！不好说！
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18楼2011-05-08 00:41:05
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keke0812

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-05-09 07:57:32
酶切时间的问题,太短没有切完全,太长酶会产生星活性
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19楼2011-05-08 21:47:07
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