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bla2009

铜虫 (小有名气)

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[求助] 质粒单酶切出现两条带

我的质粒是pGBKT7, 上面有EcoRI, BamHI,两个酶切位点，我分别单酶切，却跑出了两条带；另外这两个酶切位点是挨着的，中间只隔了几个碱基，可是我用这两个酶进行双酶切，却也跑出了两条带，这是怎么回事啊，高手请赐教。

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等笨笨

1楼 2011-04-29 16:04:03

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空谷幽风

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【答案】应助回帖

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dhd997(金币+5): good 2011-05-06 18:19:57

引用回帖:

Originally posted by bla2009 at 2011-05-04 09:59:19:
都是不同管的质粒，但是是同时挑的克隆摇的菌提的

1.有些质粒在某些感受态细胞里面扩增是不稳定的，从你的EcoRI单酶切图其实可以看出这几个条带大小是不一样的，因此你首先要确定哪个质粒条带大小（可以像你的第二图一样，分别做单酶切，但是要选用合适的marker，跑胶的时候带着完整的质粒一起跑）是正确的。
2.换几种不同的感受态把质粒重新转一下
3.把质粒测个序，不用全测，只用T7测一下就可以了，这条引物可以测完这个载体上的几乎所有的酶切位点，然后比对一下测序结果是否跟标准序列相同