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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取问题
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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] RNA提取问题

从细胞中提取ＲＮＡ，在加入Trizol后，混匀，室温放置10分钟，目的是RNA和蛋白分离，然后加入氯仿，促使RNA进入水相中，12000转，离心10分钟，取上清转移至新管，加入等体积的异丙醇，目的为了使ＲＮＡ沉淀，可是离心后没有沉淀，我不知道还用不用继续往下做？出现这种情况的原因在哪儿？请各位指教
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1楼 2011-04-28 23:46:02
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zhaotao1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+1): 2011-05-01 09:11:10
细胞中提RNA，看不到沉淀是正常的，组织中一般都能看到，我们实验室都是这样，他们最后定量的时候，RNA浓度一般都还挺大，具体的还要看你细胞养的如何，如果细胞没问题，提RNA一般不会出现问题，只要你操作没有大问题！还是定量后看看吧！
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给自己多一点时间来思考！
12楼2011-04-30 22:59:34
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+1): 2011-04-29 13:52:29
可能是肉眼看不见吧，不能完全确定没有，最好还是往下做做看
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2楼2011-04-29 08:23:02
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+1): 2011-04-29 13:52:34
有可能是氯仿残留，多加点异丙醇试一试
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3楼2011-04-29 08:31:33
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gagalady

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+2): 2011-04-29 13:52:41
加完TRIzol后，要立即把细胞裂解，这一步要求快，放十分钟没必要，5分钟就ok；
加氯仿之后，要用力震荡，（用最大的力气），这步是也要放置一会的吧
此步之后高速4度离心15分钟吧
之后就是把上清洗出来（1ml TRIzol 的话 没必要吸出很多 300微升 就很多了，吸多了 不保险呀）
异丙醇我都加 500微升  加进去要枪头混匀，之后静置10min，低温不利于沉淀哦，室温，之后4度离心，沉淀很少的，不过对着光 用肉眼看 还是很能看清楚的。
多提取几次 就利索了
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4楼2011-04-29 08:53:18
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