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康群招

新虫 (初入文坛)

[求助] (求助)请问有谁做过水蛭的凝血酶效价测定 已有2人参与

请问有谁做过水蛭的凝血酶效价测定,新手上路,想就试验中出现的几个问题请教一下。

1、水蛭药材(鉴定为蚂蝗)按2010版药典的方法测定凝血酶效价时,在加入纤维蛋白原后即出现絮状沉淀,且粘壁?前后重复了4次结果都一样。而我们做的水蛭水提醇沉的浸膏却没有这问题,能正常测定。

2、测定用的Tris-Hcl,生理盐水,纤维蛋白原,凝血酶都是新配的。

3、原来用的凝血酶有标示10单位/mg,现在买的凝血酶只标示了560IU/支,请问该怎么配制?纤维蛋白原瓶上标示的凝固物含量61%,请问这是指纯度吗?

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李-大鱼

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

试测一下水蛭提取液的PH,可能是因为提取液的酸碱度问题,调到5.0左右就没问题了。以前我也遇到过这种问题,你去百度一下水蛭含量测定,有很多文献是关于水蛭提取液PH对含量测定影响的研究
至于配制凝血酶溶液的浓度...我这边也纠结了很久,最后是这样干的,先把整瓶冻干粉拿去离心,让粉都沉在瓶底,然后加1ml生理盐水,使成560iu/ml,作为贮备液,你可以根据用量选择取多少贮备液出来稀释成10u/ml。至于缓冲液取就直接取纤维白原0.25g,溶于pH7.85的50mL的Tris-HCI缓冲液中,得0.5%的纤维蛋白原溶液。
希望可以帮到你,我也是半桶水,因为我这边用的是SIGMA的凝血酶,关于它浓度的问题我也伤透脑筋,现在还在纠结,求大神指点!!!
3楼2014-06-03 11:13:52
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clcl88

银虫 (小有名气)

不知道你找到答案没有啊?救救我也。。。刚接手做这个。。。怎么下手啊。。。有相关分享一下。。。。感激不尽啊。。。。。
2楼2013-09-03 14:18:34
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7899014as

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先把整瓶冻干粉拿去离心,让粉都沉在瓶底,然后加1ml生理盐水,使成560iu/ml,作为贮备液,你可以根据用量选择取多少贮备液出来稀释成
4楼2018-06-06 11:43:57
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7899014as

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

在37℃水浴中加热溶解牛纤维蛋白原,若仍有絮状物,可能是部分未溶的杂质,过滤去除即可。至于Sigma凝血酶瓶身上注明的1KU each,应该是每瓶凝血酶的单位是1000 U。用灭菌的一次性针头注射器吸取适量的缓冲液(如5ml)注入瓶中,混匀后吸出,再用一次性过滤器滤出凝血酶溶液置于灭菌离心管中,即得到浓度为200 U/ml(以5ml为例)的凝血酶溶液,冰箱4℃保存。使用时从冰箱取出,稀释成40 U/ml就可以了。
5楼2018-06-06 14:39:22
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