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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这样的电泳条带能测序吗？
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chen11086

铜虫 (初入文坛)

[求助] 这样的电泳条带能测序吗？

各位虫友，帮俺看看这样的电泳条带可以测出序吗，我送了20微升的样结果说我样品浓度低，俺不知道是测序公司的事，还是我该p50微升的反应体系，还是直接就不能测出序那，谢谢啦！！
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1楼 2011-04-26 19:09:47
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wangy0908

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3, EPI+1): 鼓励！回答得很详细。 2011-04-29 07:53:04
引用回帖:
Originally posted by chen11086 at 2011-04-28 15:14:09:
我也不大清楚为什么会有弥散条带的？您能帮我分析分析吗。产物的大小不确定，目前还没有这个基因从我的实验材料扩出来的文章。是不是我设计的引物有问题涅？俺是个初学者导师一下子给我这么个实验我头都大了， ...

你是做的nest pcr还是什么的呢？你适当的在调整一下PCR的体系，减少DNTP的用量等。因为弥散太严重，测序会影响，因为产物不纯！如果你在的是多次扩增PCR，就适当稀释第一次PCR或者第二次PCR产物，在扩增的。引物问题，你先确认是否专一的，主要有一端专一就可以的。
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14楼2011-04-29 05:31:50
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chen11086

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by chen11086 at 2011-04-26 19:09:47:
各位虫友，帮俺看看这样的电泳条带可以测出序吗，我送了20微升的样结果说我样品浓度低，俺不知道是测序公司的事，还是我该p50微升的反应体系，还是直接就不能测出序那，谢谢啦！！
[eimg]8e/ad/898966_1303816129 ...

忘记说了，是最右边两个条带
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2楼2011-04-26 19:10:30
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huzhihong-

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
chen11086(金币+2): 谢谢 2011-04-26 20:40:55
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-04-27 13:15:47
chen11086(金币+1): 2011-04-28 15:18:33
20微升的确有点少，改为50微升应该可以测出来的！！
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3楼2011-04-26 19:50:27
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我现在还没做到测序那一部分。可是你那个亮度可以了呀，请问你上样多少？
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坚持，一秒钟，就离，成功，近一步！
4楼2011-04-27 22:08:57
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