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wzc4884

金虫 (正式写手)

[求助] 求助关于BL21DE3感受态细胞相关的问题，谢谢！

大家好！希望大家给予帮助，谢谢了！
    最近构建重组质粒，一直做 DH5α的转化，一直没有单克隆生长。昨天做了BL21DE3的转化，发现长出一个单克隆，但是我不能确定是否是阳性克隆。请问：能将挑取的在BL21DE3中转化生长的单克隆进行PCR验证吗？倘若提取BL21DE3转化后摇菌的质粒，是否会提不出来呢？
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1楼 2011-04-25 11:23:32
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 可以分享一下经验 2011-04-25 16:00:15
wzc4884(金币+1): 2011-04-25 16:43:21
不会，起码不绝对
我做过BL21(DE3)的提质粒，和菌落PCR
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2楼2011-04-25 12:21:06
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wzc4884

金虫 (正式写手)
谢谢指点！
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3楼2011-04-25 16:44:02
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): yes~ 2011-04-25 23:38:42
BL21(DE3)是表达用的菌株，鉴定提质粒与DH5α一样，只是可能提出的质粒浓度要比DH5α浓度低。
赞一下(1人) 回复此楼
生命不息，探索不止。
4楼2011-04-25 21:27:22
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wzc4884

金虫 (正式写手)
谢谢大家，今天将质粒提取了，希望有好的结果出现
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5楼2011-04-25 23:22:57
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by wzc4884 at 2011-04-25 23:22:57:
谢谢大家，今天将质粒提取了，希望有好的结果出现

祝楼主好运，呵呵~
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6楼2011-04-26 00:14:08
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逍遥之乐缘

银虫 (正式写手)
BL21提取的质粒不太好，不过可以提取之后再转到DH5@里面，再进行菌落PCR鉴定
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7楼2015-01-14 09:43:03
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