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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题！

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达，都实现了预期目标，可是在测定比活力（IU/mg）时发现一个奇怪的现象：

大肠杆菌表达为胞内，因此采用冻融破胞后，测定破胞液的总蛋白量，计算比活力；而毕赤酵母表达是胞外分泌，因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果，后者是前者的一半！

这个这么解释啊？一般来说，酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗？怎么比活力反而会低于细菌呢？

P.S.该目的基因富含AT，来自真菌
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1楼 2011-04-22 21:54:19
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-04-22 22:32:02:
我觉得可能是与酶的催化条件有关，包内分泌裂解后整体水平应该为生理水平，相对的的酶活应该属于生理水平上的，但分泌到胞外后，培养基的离子浓度，PH值可能不能使酶活达到最高，因此出现上述的情况。

培养基离子浓度。。。。那也不该相差这么大啊~~~

什么叫做生理水平？
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6楼2011-04-22 23:05:25
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
1949stone: 这个没有奖励啊 2011-04-23 10:57:40
纯属猜测，不应助，仅供参考
可能是酵母胞内还有蛋白吧。试试把酵母液破胞后再测。
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2楼2011-04-22 22:00:58
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蓝月望宁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-04-23 10:57:51
我就我的知识说点自己的想法。虽然目的基因来自真核细胞，在原核细胞上实现表达比较困难，因为原核细胞没有真核基因表达所需的一些调控序列。但是一旦发生了表达了，我们就不应该考虑这方面的因素了，而应该从你提取这种蛋白的方法等上面找原因了。或者有偶然因素在里面，比如，存在基因多拷贝呢？希望高人指正！！
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坚持，一秒钟，就离，成功，近一步！
3楼2011-04-22 22:28:31
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 有道理 2011-04-23 10:58:00
我觉得可能是与酶的催化条件有关，包内分泌裂解后整体水平应该为生理水平，相对的的酶活应该属于生理水平上的，但分泌到胞外后，培养基的离子浓度，PH值可能不能使酶活达到最高，因此出现上述的情况。
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4楼2011-04-22 22:32:02
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