24小时热门版块排行榜    

查看: 2003  |  回复: 10
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

[求助] 板上有做过Gel-shift的朋友没?

最近准备做这个,主要是检验蛋白和DNA的结合作用,我是把可能结合的DNA合成为5‘-Biotin的引物,表达蛋白反应后再跑聚丙烯酰胺的非变性胶,后面用照胶仪检测荧光,由于是第一次做,也没什么经验,不知道各位有什么建议以及注意事项没?
还有一点不确定的是这个蛋白结合DNA位点是结合双链的还是单链的,如果是双链的,我能不能合成一对互补引物通过退火是她们变成双链再反应?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

微纳材料

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

在等待中涅槃重生
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

类似杂交不用抗体,需要显色液辅助。
我这的照胶仪有直接的biotin选项,所以你后面的问题我不太拿得准,看看别人的回答吧,呵呵
6楼2011-04-20 22:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yuxia82012(金币+1): 非常好的建议 2011-04-20 22:14:55
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-04-20 23:07:33
西瓜(金币+3, EPI+1): 热心,专业的高手 2011-04-20 23:08:49
1.标记的探针与结合蛋白需要在室温下结合一段时间,一般为10-20分钟。
2.如果是检验可能的结合还需要做探针的冷竞争反应。
3.注意下电泳时间和转膜的时间,如果你是用干胶仪的话就需要注意电泳的时间,一般为10v/cm.。
4.结合实验需要用双链的探针,可以使用退火的双链探针。
2楼2011-04-20 21:45:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

我还有几个问题,就是我能不能直接跑完胶不转膜检测,楼上说的干胶仪是什么东东,不转膜的话一定得用吗?
我的DNA链长只有20多个碱基,一般跑多大浓度的胶合适?
谢谢了
在等待中涅槃重生
3楼2011-04-20 22:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励热心朋友 2011-04-20 23:08:13
1.我用biotin的时候都是转膜去显影,以前试过直接显效果不太好,不过你可以试试,用同位素时我都是用干胶仪干胶后显影,因为同位素灵敏度较高。
2.4%-6%的都可以,推荐用6%,胶要结实点便于操作,你可以在空泳道加上一点有颜色的loading,一般跑到距下沿1/3处就差不多了
4楼2011-04-20 22:28:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 能否申诉? +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:28 by xiangy672
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见