24小时热门版块排行榜    

查看: 2004  |  回复: 10
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

[求助] 板上有做过Gel-shift的朋友没?

最近准备做这个,主要是检验蛋白和DNA的结合作用,我是把可能结合的DNA合成为5‘-Biotin的引物,表达蛋白反应后再跑聚丙烯酰胺的非变性胶,后面用照胶仪检测荧光,由于是第一次做,也没什么经验,不知道各位有什么建议以及注意事项没?
还有一点不确定的是这个蛋白结合DNA位点是结合双链的还是单链的,如果是双链的,我能不能合成一对互补引物通过退火是她们变成双链再反应?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

微纳材料

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

在等待中涅槃重生
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s1523466

新虫 (小有名气)

是用琼脂糖区分的蛋白和蛋白和核酸的复合物吗

发自小木虫IOS客户端
10楼2018-07-02 10:34:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yuxia82012(金币+1): 非常好的建议 2011-04-20 22:14:55
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-04-20 23:07:33
西瓜(金币+3, EPI+1): 热心,专业的高手 2011-04-20 23:08:49
1.标记的探针与结合蛋白需要在室温下结合一段时间,一般为10-20分钟。
2.如果是检验可能的结合还需要做探针的冷竞争反应。
3.注意下电泳时间和转膜的时间,如果你是用干胶仪的话就需要注意电泳的时间,一般为10v/cm.。
4.结合实验需要用双链的探针,可以使用退火的双链探针。
2楼2011-04-20 21:45:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

我还有几个问题,就是我能不能直接跑完胶不转膜检测,楼上说的干胶仪是什么东东,不转膜的话一定得用吗?
我的DNA链长只有20多个碱基,一般跑多大浓度的胶合适?
谢谢了
在等待中涅槃重生
3楼2011-04-20 22:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励热心朋友 2011-04-20 23:08:13
1.我用biotin的时候都是转膜去显影,以前试过直接显效果不太好,不过你可以试试,用同位素时我都是用干胶仪干胶后显影,因为同位素灵敏度较高。
2.4%-6%的都可以,推荐用6%,胶要结实点便于操作,你可以在空泳道加上一点有颜色的loading,一般跑到距下沿1/3处就差不多了
4楼2011-04-20 22:28:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 能否申诉? +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见