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111602

木虫 (著名写手)

[交流] 线性化及完整的质粒电泳问题。 已有8人参与

最近在做实验过程中,遇到要将质粒先线性化,发现用酶切后电泳,与未酶切的质粒相比,跑的速度要快,不知是何原因,这些质粒都非空载,有些不理解,一般线性后跑的速度应该比超螺旋快才对啊。请高手指教!

首先感谢各位的讨论和建议。但必须说明一点,这个质粒是重组的,而且选择的酶只有一个酶切位点,电泳用的是1% AGAROSE GEL. 120V  30MIN.并且可以肯定已经被线性化的了。因为后继实验如果没有被线性化是无法成功的。


大家的回答都是建立在理论分析基础上的。我也赞同这一理论,但不知道有没有真正做过这一实验的朋友,可能我的实验(电泳)出了问题,但希望有实践经验的朋友给点意见。

[ Last edited by 111602 on 2011-4-21 at 01:42 ]
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
呵呵,王镜岩的《生物化学》里是说:超螺旋》线性》开环。超螺旋跑最快滴。考研也考得很多。
14楼2011-04-20 15:33:32
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