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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 设计引物
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小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 设计引物 已有10人参与

要克隆下面这段基因，
atgacctcagcatccaaaggaattctccgcccatttttaattgtctgcattatcctggcctgctccatggtgtgtctgttcatttacatcaagcccaccaacagctggatcttcagcccgatggagtcagccagctcagtgctgaaaatgaaaaatttcttctccaccaaaactggtgattttaatgaaactactattctgatttgggtgtggccatttgggcagacctttgaccttacatcttgccaagcaatgttcaacatccaaggatgccatctcacgacagaccgttctctgtacaacaagtctcacgcagttctgatccaccaccgagacatcagttgggatctgaccaatttacctcagcaggcgaggccacccttccagaaatggatttggatgaatttggaatcaccgactcacacaccacagaagagtggcattgagcacctgttcaacctgactctgacttatcgccgtgactcagatatccaagtgccttatggtttcttgaccgtaagcacaaaccccttcgtgtttgaagtgccaaacaaagagaagttagtgtgctgggttgtaagtaactggaaccctgagcatgccagagtcaagtattacaatgagctaagcaaaagcattgaaatccatacctatgggcaagcatttggagaatacgtgactgataaaaatttgattcctaccatatctacttgcaaattttatctttcctttgaaaactcaatccacaaagattacatcacagaaaagctctacaatgcttttctggctggctctgtgcctgttgttttggggccatctagggaaaactatgagaattatattccagcagattcattcattcatgtggaagattataactctcccagtgagctagctaagtatctgaaggaagtagacaaaaacaataaattataccttagttactttaactggaggaaagatttcacagtaaatcttcctcgattttgggaatcacatgcatgcttggcttgtgaccatgtgaaaaggcatcaagagtataaatccgttggtaatttagagaaatggttttggaattaa
我设计的引物为
F:ACTGAGCCTAGGATGACCTCAGCATCCAAAGG
R:AAGGAAAAAAGCGGCCGCTTAATTCCAAAACCATTTCTCTAAATTACC
请大家给点意见啊
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1楼 2011-04-18 13:33:33
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 对啊 2011-04-18 18:50:57
自己用软件检测一下就可以了。。只要两条引物的TM值和GC含量差不多就可以了
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-04-18 14:53:21
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): good 2011-04-18 18:51:11
反向引物后面搞那么多A干吗，这两条引物GC含量差的太多了，把那些A换成G或C平衡一下GC含量不是更好吗
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-18 17:09:01
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雷我爱罗

银虫 (初入文坛)
Tn值太大了吧
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4楼2011-04-18 20:16:23
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
呵呵，自己学学用软件怎么分析吧。
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5楼2011-04-18 23:38:37
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zhixuec

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): 很活跃，继续加油啊 2011-04-19 08:27:26
反义链的引物太长

正反引物差最好不超过3-5个bp

你可以用primer5.0分析一下

还有正反链的Tm值不要超过10
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酷爱の族
6楼2011-04-18 23:50:35
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 你可以开个专贴，大大奖励哦，不过资源帖不授予EPI 2011-04-19 08:28:06
同学，我们看完了，帮你用软件测了，下次你依旧得来这里求助，授人以鱼不如授人以渔。
基本的 几个原则。
1 酶切位点前有1-3个保护碱基就够了，你设计的太多了。
2 GC含量两个引物要差不多。
3 使用premier  prime5.0设计，oligo6.0检验。

版主，看来得写个帖子专门教给大家使用软件啦！好多小盆友问这些基本软件使用哦~呵呵~
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
7楼2011-04-19 00:40:44
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mirror3895

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by beibei9535 at 2011-04-19 00:40:44:
同学，我们看完了，帮你用软件测了，下次你依旧得来这里求助，授人以鱼不如授人以渔。
基本的 几个原则。
1 酶切位点前有1-3个保护碱基就够了，你设计的太多了。
2 GC含量两个引物要差不多。
3 使用premier   ...

同意同意，等待ing
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8楼2011-04-19 08:36:34
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nanobio8816

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-04-19 14:04:33
没搞清楚，我把你设计的引物放到primer primer里发现根本就不对啊，一下是我用软件search到的结果，你看下怎么样
sense：ACAAGTCTCACGCAGTTC
antisense：CGATAAGTCAGAGTCAGGTT
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9楼2011-04-19 09:25:25
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yanying198

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 感谢分享+鼓励新虫交流 2011-04-19 14:05:02
你可以用这个计算
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10楼2011-04-19 09:33:28
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