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请教高手：1、为什么我在蓝白斑筛选的时候，板子上全是白斑，没有篮班，但是菌液pcr检测的时候，跳了120多个菌，才有2个p出目的条带！ 2、为什么我的板子上白斑少，并且都在靠近培养皿的边上，连成一片，没有分开！ |
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beibei9535
荣誉版主 (职业作家)
晕晕小版主~ 姑娘你好！
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): 2011-04-20 13:49:23
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6, EPI+1): 2011-04-20 13:49:23
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首先解决你问题。 其次，想给点建议，希望能明白蓝白斑筛选的原理和注意事项。 1、为什么我在蓝白斑筛选的时候，板子上全是白斑，没有篮班，但是菌液pcr检测的时候，跳了120多个菌，才有2个p出目的条带！ 额，第一看自己的载体有蓝白斑筛选标记嘛？第二，看X-GAL和IPTG是否失效。X-GAL是密闭保存的，一般用灰色或者锡纸包装起来，会见光分解故失效。第三，没有蓝斑，可以放在4度冰箱下一段时间，会有显色。但是不以为这有白斑就是有目的条带，还是得做菌液PCR或者菌落PCR。 2、为什么我的板子上白斑少，并且都在靠近培养皿的边上，连成一片，没有分开！ 有时候白斑多不见得是成功了，也有可能是假阳性。靠边连成片的最好不要选。因为都不是均一菌体了。考虑如下原因第一，没有涂云。第二，培养时间过了？ 原则上，尽量从中间选择单个菌落。这样菌体一致。边上由于涂板时候毕竟会不匀，故尽量弃之。 祝福你早日解决问题！！ |
14楼2011-04-20 13:09:21
天使托
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T.Shen
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空谷幽风
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5楼2011-04-18 17:11:33