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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】冰冻切片免疫荧光观察肿瘤血管
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
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wah235(金币+2): 谢谢，很详细 2011-04-16 16:51:40
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-04-17 14:26:15
引用回帖:
Originally posted by wah235 at 2011-04-15 17:05:52:
各位朋友大家好，我想对肿瘤血管进行免疫荧光观察。过程：先进行心脏灌注以免血液影响；4%多聚甲醛固定；切片；观察。也有灌注完之后直接冰冻切片，是不是有冰晶干扰观察？固定怎么办？
我都糊涂了，不知道该怎么 ...

是的
冰冻切片有人就是灌注完了就直接切片的
但是要求时间要抓紧的
就是灌注完了立刻切片
这种方法就是抗原保护得特别好
但是容易被酶降解
所以要求切片速度
还要求切片手法要好
因为没固定脱水的组织特别软
比较难切的
但是不用考虑冰晶的
因为冰晶是在-40度才大量产生
而冰冻切片一般是在-20至-25度完成的

但是要是灌注后固定在切片的话
就是可以让组织充分固定
抗原蛋白可以长期存在
可以报组织保存在-20至-80度
慢慢切片至最好效果
然后染色
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2楼2011-04-16 10:58:39
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