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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】分子筛柱效测定
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xinshi

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助】分子筛柱效测定

分子筛柱效测定一般选择1%丙酮上样（体积为1%柱床体积），上样量大了或者小了有什么影响呢？
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1楼 2011-04-15 16:24:51
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-15 20:21:33
上样大了，各峰交叠，分离效果不佳，
上样少了，分离效果可以保证，但是分离得到的蛋白量少，可能某峰就被因此被忽略了。

除了按照柱体积1%-2%外，跟样品本身的蛋白含量也是有关的。
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2楼2011-04-15 19:20:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5): 鼓励哦~希望对楼主有所帮助~ 2011-04-16 19:04:43
lstt09nk(EPI+1): 有理有据 2011-04-16 21:46:21
xinshi(金币+4): 2011-04-18 18:13:51
这是GE公司SuperdexTM 75说明书的部分介绍，我把说明书作为附件传上来

Column performance control
Check the performance of the column using the following procedure:
Sample: 100 μl 0.5% acetone (5mg/ml)
Eluent: buffer solution or distilled H2O
Flow rate: 0.75 ml/min, room temperature
Detection: 280 nm
Column efficiency, expressed as the number of theoretical plates per meter, N/m, is
calculated using the following equation:
N/m = 5.54 × (vr / w½平方 × (1000/L)
where
N/m = number of theoretical plates/meter
vr = peak elution distance (m)
w½ = peak width at half peak height (m)
L = bed height (m)

上述层析柱长0.24m。

假如上样量体积大，则峰宽与半峰宽更接近，比值更接近1，则理论塔板数/m更小，柱效低。另外，楼主所用的体积如果依据这个说明书来看就太大了。PS：用丙酮测柱效而不是用蛋白质，二楼说的是分离蛋白质时上样量的问题。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-16 at 19:57 ]
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3楼2011-04-16 15:20:54
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
N/m = 5.54 × (vr / w½平方 × (1000/L)

怎么给我弄出了个害羞表情来。

每米的理论塔板数N/m=5.54×（峰宽/半峰宽）平方×（1000/柱长）
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4楼2011-04-16 15:23:59
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