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【求助/交流】氧化亚铁硫杆菌和氧化硫硫杆菌的染色计数方法 已有2人参与
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最近我要做微生物淋滤实验，现在已经大致从底泥中分离出了这两种微生物。从文献中查到T.f和Tt分别用草酸铵结晶紫和石碳酸复红染色。 张冬艳, 氧化亚铁硫杆菌生长量的染色测定法. 内蒙古医学院学报, 1996(02).见附件 结晶紫染色血球计数器法:用上述同一份菌液5ml加结晶紫染液1ml,混匀后, 用血球计数器法镜下计数蓝色的活菌数, 重复计数5次.染色后放置5h 活菌计数:取上述同一份菌液5ml加结晶紫染液1ml ,混匀后放置5h , 用上述方法测定, 重复计数5次. 我今天试了草酸铵结晶紫染色T.f染色（在试管中滴加染色液染色）后一段时间（用显微镜40×10）在血球计数板上可以看到有微生物（貌似是杆状的）在动并且看起来像是两个菌体粘再一起的。然后试了一下油镜，在油镜下血球计数板的计数区的线不清晰，虽然能看到有少量微生物在活动。 问题 1.盖玻片（新买的）上有花纹么，有人说时盖玻片是脏的，盖玻片在使用前要处理么； 2.不能确定活动的微生物是否是目标微生物，有没有简单的方法来确定它（蓝色背景下微生物颜色不是太清晰），相差显微镜在观察时要用什么样的滤光片（现有蓝、黄、绿、白）； 3.染色液是配后放置48h然后再使用么；染色时间具体为多长为宜，文献说5h时后菌体仍是活的，今天过了2h好像就看不到微生物在动了； 4.用显微镜计数实在废眼，求简便方法。 |
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newtime007
木虫 (正式写手)
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结合自己的工作，作出回答，希望能帮到你。 1.盖玻片（新买的）上有花纹么，有人说时盖玻片是脏的，盖玻片在使用前要处理么； 一般情况下新买盖玻片没有花纹，不用处理，不影响使用。如果不放心可以用0.1mol/L盐酸浸泡，用纯水冲干净即可。 2.不能确定活动的微生物是否是目标微生物，有没有简单的方法来确定它（蓝色背景下微生物颜色不是太清晰），相差显微镜在观察时要用什么样的滤光片（现有蓝、黄、绿、白）； 是否是你的目标微生物，不是通过显微镜来确定的，显微镜只是观察你的菌是否正常。你只有确保培养的微生物是纯菌落，且是你的目标微生物，再来观察，至于清晰与否，适当调整光源强度，也可选用滤光片。 3.染色液是配后放置48h然后再使用么；染色时间具体为多长为宜，文献说5h时后菌体仍是活的，今天过了2h好像就看不到微生物在动了； 染色液没有规定放置多长时间才能使用，一般静置的目的是让不溶晶体沉淀，以免干扰视野，你可以超声溶解，或过滤就可使用。用结晶紫染色军体易死亡，至于你所说的情况，可能与染色液浓度有关。但最好染色后就镜检。 4.用显微镜计数实在废眼，求简便方法。 显微镜计数快，也可稀释涂平板计数，这样得到的是活菌数。 |
2楼2011-04-14 20:14:04
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521孟晓瑜
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